应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题
571/6返回列表123456下一页
查看: 5112  |  回复: 56
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

areslhr

铁虫 (小有名气)

[交流] 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 已有29人参与

LZ 在国外访问，做昆虫线粒体基因组的。
提完模板之后，扩增最简单的COX1基因，胶图如下
一个导致我做了20次PCR也没找到的问题

之后为了增加样本量，又提了两次也还好。后来突然有一次就开始出现拖带，并且不再出现原条带。而12S 基因扩增的很好，条带十分清晰。 为了查明是哪部分原因。
做了很多次PCR，可谓心力交瘁。
1.用了三台机器，排除机器原因。 2.更换premix，更换水，重新配置引物，无效果。 3.两种模板均出现此情况 4.作为negative，以水替代DNA的对照也出现同样的拖带。 5。12S可以稳定扩增。如图。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-1

今天换了一种新的模板作为对照，更加诡异。拖带和条带同时存在，而原模板和水仍然无条带，仅有拖带。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-2

我最不理解为什么新换的水里也有拖带，如有高手指教，不胜感激。

对不起我只有4.5个金币，还不能悬赏。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-3
1.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-4
2.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-5
601800125818983966.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Stop and stare
1楼 2015-12-18 20:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:40
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2015-12-19 02:03:12
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

glove94

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

发自小木虫Android客户端
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2015-12-19 00:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenreal

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:53:09
与其重复这么多次，不如一次多做几个对照，就那么几种成分，缺酶的、缺DNTP、缺引物的，甚至加管儿纯水，stepwise吧。
赞一下(2人) 回复此楼
21楼2015-12-22 05:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦幻小豚豚

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做实验也出现过拖带，也是各种更换，你配胶的染色剂更换过吗？还有就是胶浓度。我也是新手，不是很懂，你好好加油。总会解决的。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2015-12-20 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:53:25
我之前也出现过拖带的现象，是因为胶回收之后，再次PCR加入的模板量太高，降低了模板量之后就解决了，或者可能是因为胶回收产物中的某些试剂影响了PCR反应。
赞一下(1人) 回复此楼
大手牵小手
20楼2015-12-22 04:03:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by glove94 at 2015-12-19 00:51:44
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

哎、是啊..我不知道怎么办好了
赞一下 回复此楼
Stop and stare
4楼2015-12-19 18:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by becklittle at 2015-12-19 02:03:12
pcr的污染就是这么神奇。，无论把试剂怎么换都不行。可能污染源在枪在桌子在空气里。尤其是和质粒实验共用的地方
试试换个实验室做，看看是不是就正常了

除了枪我想不出来了，桌子每次都有UV灭菌。
如果枪污染的话，12S基因不知道可以跑出来很好的条带。
赞一下 回复此楼
Stop and stare
5楼2015-12-19 18:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈爱中

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物二聚体都没得，pcr反应都没正常进行吧！

自己把试剂和pcr反应程序的温度设置好好看看。
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-19 20:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Niliria

木虫 (小有名气)
水居然也有

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2015-12-19 20:51:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-12-19 21:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈天龙2010

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问题应该在模板上。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
无始无终
9楼2015-12-19 21:04:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

likelich

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该有外源dna污染 考虑清洁实验室或者使用dnaoff类试剂处理实验器具

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-19 22:58:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 areslhr 的主题更新
571/6返回列表123456下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +6 archvillain 2026-08-15 10/500 2026-08-15 14:29 by 枫叶之巅
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 8/400 2026-08-15 11:53 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 11:41 by KxMI1BYBxWX1
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭