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stephenreal

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:53:09
与其重复这么多次，不如一次多做几个对照，就那么几种成分，缺酶的、缺DNTP、缺引物的，甚至加管儿纯水，stepwise吧。
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21楼2015-12-22 05:17:54
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lifs0624

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是气溶胶污染，那么应该是到处都有你的扩增片段，所以可以换个扩增不同目的片段的新引物

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努力做好自己能做的，静待命运的眷顾！
22楼2015-12-22 06:28:13
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areslhr

铁虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by qauzgd at 2015-12-21 15:07:10
带滤芯的枪头，戴口罩头套或者台子里配制体系。试下吧

枪头有滤芯.台子有在用。 以前很轻松随意就能跑出来的片段竟然突然出不来了
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Stop and stare
23楼2015-12-23 11:32:31
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by stephenreal at 2015-12-22 05:17:54
与其重复这么多次，不如一次多做几个对照，就那么几种成分，缺酶的、缺DNTP、缺引物的，甚至加管儿纯水，stepwise吧。

谢谢。
今天刚刚订了新的引物，结果一样，排除了引物的问题。
也许我该试试纯水仅加引物，和纯水仅加DNTP和酶的MIX的情况。
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stephenreal
Stop and stare
24楼2015-12-23 11:34:18
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-12-21 22:38:49
楼主可以换下Loading buffer试一下，看看有没有污染

嗯、这个我还没试过。
不过buffer出问题的话为什么没影响其他的目的片段呢。

不过我会试一试
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Stop and stare
25楼2015-12-23 11:37:19
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stephenreal

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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引用回帖:
24楼: Originally posted by areslhr at 2015-12-23 11:34:18
谢谢。
今天刚刚订了新的引物，结果一样，排除了引物的问题。
也许我该试试纯水仅加引物，和纯水仅加DNTP和酶的MIX的情况。...

祝好运!但不要一次试一个，一起试包括已经试过的，也不多，五六个对照，看是duplicate还是triplicate了，不也才十多管吗!

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26楼2015-12-23 11:38:21
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-21 15:02:52
1、确定你的模板和引物没有问题吗？
2、只用UV照射是不行的，UV只能破坏较大片段的核酸，对片段较小的核酸没有效果。做实验的台面要用百分之七十的乙醇全擦一遍，我们一般是用喷壶喷到台面上，然后再擦。

引物问题已确定没问题，今天新订的引物，现象依然。
更换模板后，确实出现了条带，但是拖带包括negetive 仍然出现。 在拖带中出现了清晰的条带，不知如何解释？
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27楼2015-12-23 11:43:55
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 躺路上 at 2015-12-20 10:47:36
得换实验室了，看来你的实验室全是dna气溶胶

何以见得呢？
每次都是在工作台里进行的，酒精擦过，然互UV镜处理实验用品半个小时
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28楼2015-12-23 11:44:57
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 梦幻小豚豚 at 2015-12-20 10:18:51
我做实验也出现过拖带，也是各种更换，你配胶的染色剂更换过吗？还有就是胶浓度。我也是新手，不是很懂，你好好加油。总会解决的。

这个还真没，不过染色剂有问题的话不会影响marker和其他片段么？我会试试
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29楼2015-12-23 11:46:19
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-21 15:02:52
1、确定你的模板和引物没有问题吗？
2、只用UV照射是不行的，UV只能破坏较大片段的核酸，对片段较小的核酸没有效果。做实验的台面要用百分之七十的乙醇全擦一遍，我们一般是用喷壶喷到台面上，然后再擦。

引物今天用了重新订的，依然如此，可以排除。
模板的话换了另外一个模板，出现拖带中的清晰条带，好诡异啊，negative中也有条带。
您说的第二步我有注意。
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Stop and stare
30楼2015-12-23 11:48:54
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