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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 梦幻小豚豚 at 2015-12-20 10:18:51
我做实验也出现过拖带，也是各种更换，你配胶的染色剂更换过吗？还有就是胶浓度。我也是新手，不是很懂，你好好加油。总会解决的。

谢谢，还没试过。
不过染色剂有问题，其他片段和marker不知道为什么正常。
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31楼2015-12-23 11:50:15
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Niliria at 2015-12-19 20:51:36
水居然也有

是啊、然而换个引物就没有了
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32楼2015-12-23 11:53:51
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足下客

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果所有的原材料问题都排除了，那就可能是上面的人说的气溶胶污染了。我们做荧光PCR经常遇到，需要整个实验室进行灭菌消毒处理。
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33楼2015-12-23 11:55:42
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 董小露 at 2015-12-21 15:11:04
楼主你现在解决这个问题了么，我也是碰到了这样的情况，就是解决不了

还木有。哭。。
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34楼2015-12-23 11:56:13
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eagle00768

木虫 (小有名气)
模版量太高了吧

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35楼2015-12-23 11:58:28
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by stephenreal at 2015-12-23 11:38:21
祝好运!但不要一次试一个，一起试包括已经试过的，也不多，五六个对照，看是duplicate还是triplicate了，不也才十多管吗!
...

谢谢老师！ 定当汇报结果，感觉这件事会让我成长很多。
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36楼2015-12-23 11:59:14
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eagle00768

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把模版稀释10倍或者20倍了再扩增看看

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37楼2015-12-23 12:00:25
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-23 11:55:42
如果所有的原材料问题都排除了，那就可能是上面的人说的气溶胶污染了。我们做荧光PCR经常遇到，需要整个实验室进行灭菌消毒处理。

谢谢您.我打算用纯水再做一次对照。

如果是气溶胶的话，应该别人也会出现问题啊, 虽然是圣诞放假，但是实验室还有人留下做实验
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38楼2015-12-23 12:03:06
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jim326

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议把模版梯度稀释比如稀释10-10000倍，或者梯度增加退火温度试试

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39楼2015-12-23 12:05:18
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看海的snoopy

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Pcr的时候把退火温度提高一点，可以做个退火温度梯度，从你的50度到65度不等。

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40楼2015-12-23 12:06:20
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