24小时热门版块排行榜    

查看: 5173  |  回复: 56
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)

[交流] 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 已有29人参与

LZ 在国外访问,做昆虫线粒体基因组的。
提完模板之后,扩增最简单的COX1基因,胶图如下
一个导致我做了20次PCR也没找到的问题

之后为了增加样本量,又提了两次也还好。后来突然有一次就开始出现拖带,并且不再出现原条带。而12S 基因扩增的很好,条带十分清晰。 为了查明是哪部分原因。
做了很多次PCR,可谓心力交瘁。
1.用了三台机器,排除机器原因。 2.更换premix,更换水,重新配置引物,无效果。 3.两种模板均出现此情况 4.作为negative,以水替代DNA的对照也出现同样的拖带。 5。12S可以稳定扩增。如图。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-1

今天换了一种新的模板作为对照,更加诡异。拖带和条带同时存在,而原模板和水仍然无条带,仅有拖带。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-2

我最不理解为什么新换的水里也有拖带,如有高手指教,不胜感激。

对不起我只有4.5个金币,还不能悬赏。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-3
1.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-4
2.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-5
601800125818983966.jpg
回复此楼
Stop and stare
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by stephenreal at 2015-12-23 11:38:21
祝好运!但不要一次试一个,一起试包括已经试过的,也不多,五六个对照,看是duplicate还是triplicate了,不也才十多管吗!
...

谢谢老师! 定当汇报结果,感觉这件事会让我成长很多。
Stop and stare
36楼2015-12-23 11:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 57 个回答

glove94

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
maker没有拖带,胶和缓冲液应该是没有问题的

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-19 00:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:40
本帖仅楼主可见
3楼2015-12-19 02:03:12
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

areslhr

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by glove94 at 2015-12-19 00:51:44
maker没有拖带,胶和缓冲液应该是没有问题的

哎、是啊..我不知道怎么办好了
Stop and stare
4楼2015-12-19 18:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见