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看海的snoopy

金虫 (正式写手)

还有,每次100ul好浪费,用10微升试试。

发自小木虫Android客户端
41楼2015-12-23 12:07:39
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areslhr

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
35楼: Originally posted by eagle00768 at 2015-12-23 11:58:28
模版量太高了吧

本来觉得是,但是纯水也会出现
Stop and stare
42楼2015-12-23 12:07:49
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履霜

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
easy,退火温度时间太短,扩增不完全导致涂抹带,怀疑污染的话,换水。

发自小木虫Android客户端
I measured love by the extent of my jealousy...
43楼2015-12-23 12:29:14
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无知的小强

木虫 (正式写手)

Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
44楼2015-12-23 12:36:34
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yglky

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、阴性对照也出现条带,说明污染PCR体系。这个很难找到哪个组分污染,建议彻底更换新的体系。
2、拖带现在可能有两个原因:模板量太大或者dNTP太多,模板量偏多是主要原因
45楼2015-12-23 14:56:59
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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
36楼: Originally posted by areslhr at 2015-12-23 11:59:14
谢谢老师! 定当汇报结果,感觉这件事会让我成长很多。...

客气了。

发自小木虫Android客户端
46楼2015-12-23 17:23:47
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纳米之心

木虫 (文坛精英)

祝福楼主
火星人要回火星了!!!
47楼2015-12-23 17:32:34
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whitewave

至尊木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我先说个让楼主感觉好点的事,我读硕士的时候曾经克隆一个昆虫基因6个月也没有成功!说点个人的建议,有人说枪污染,这个容易忽略。除了枪,试剂特别是水!另外还有你的pcr管这些都有可能!至于扩不出来,引物和反应条件都没有问题?模板做了DNA完整性分析?我主要是来给楼主打气的,希望你能成功。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
天生我才
48楼2015-12-23 18:23:56
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areslhr

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
48楼: Originally posted by whitewave at 2015-12-23 18:23:56
我先说个让楼主感觉好点的事,我读硕士的时候曾经克隆一个昆虫基因6个月也没有成功!说点个人的建议,有人说枪污染,这个容易忽略。除了枪,试剂特别是水!另外还有你的pcr管这些都有可能!至于扩不出来,引物和反应 ...

谢谢您!我真觉得再卡在这老板就要开骂了,很多基因都是要慢慢试,但是因为这个就是最简单COX1基因,无论在国内或是国外我都很简单的做出来过。突然就不行了。
Stop and stare
49楼2015-12-23 20:53:28
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areslhr

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
45楼: Originally posted by yglky at 2015-12-23 14:56:59
1、阴性对照也出现条带,说明污染PCR体系。这个很难找到哪个组分污染,建议彻底更换新的体系。
2、拖带现在可能有两个原因:模板量太大或者dNTP太多,模板量偏多是主要原因

其实我能换的都换了. 除了模板和枪,而且不太理解为什么没有模板的negative还能出来东西。

模板量太大不可能,当时所用DNA第一提取最开始有条带,现在是稀释10倍之后的版,条带消失了。

DNTP有一点点可能,因为最近枪出现了问题,会比正常值多抽出来一点。

唉。真的要哭了。
Stop and stare
50楼2015-12-23 21:24:00
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