一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 - 分子生物 - PCR相关

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看海的snoopy

金虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

还有，每次100ul好浪费，用10微升试试。

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41楼2015-12-23 12:07:39

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areslhr

铁虫 (小有名气)

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引用回帖:

35楼: Originally posted by eagle00768 at 2015-12-23 11:58:28
模版量太高了吧

本来觉得是，但是纯水也会出现

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Stop and stare

42楼2015-12-23 12:07:49

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履霜

木虫 (正式写手)

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专业: 发育生物学与生殖生物学

★
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easy，退火温度时间太短，扩增不完全导致涂抹带，怀疑污染的话，换水。

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I measured love by the extent of my jealousy...

43楼2015-12-23 12:29:14

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无知的小强

木虫 (正式写手)

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专业: 精子发生异常与男性不育

模板减少点试试

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Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.

44楼2015-12-23 12:36:34

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yglky

金虫 (正式写手)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

1、阴性对照也出现条带，说明污染PCR体系。这个很难找到哪个组分污染，建议彻底更换新的体系。
2、拖带现在可能有两个原因：模板量太大或者dNTP太多，模板量偏多是主要原因

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45楼2015-12-23 14:56:59

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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)

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引用回帖:

36楼: Originally posted by areslhr at 2015-12-23 11:59:14
谢谢老师！定当汇报结果，感觉这件事会让我成长很多。...

客气了。

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46楼2015-12-23 17:23:47

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纳米之心

木虫 (文坛精英)

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祝福楼主

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火星人要回火星了！！！

47楼2015-12-23 17:32:34

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whitewave

至尊木虫 (正式写手)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

我先说个让楼主感觉好点的事，我读硕士的时候曾经克隆一个昆虫基因6个月也没有成功！说点个人的建议，有人说枪污染，这个容易忽略。除了枪，试剂特别是水！另外还有你的pcr管这些都有可能！至于扩不出来，引物和反应条件都没有问题？模板做了DNA完整性分析？我主要是来给楼主打气的，希望你能成功。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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天生我才

48楼2015-12-23 18:23:56

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areslhr

铁虫 (小有名气)

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专业: 生化分析及生物传感

引用回帖:

48楼: Originally posted by whitewave at 2015-12-23 18:23:56
我先说个让楼主感觉好点的事，我读硕士的时候曾经克隆一个昆虫基因6个月也没有成功！说点个人的建议，有人说枪污染，这个容易忽略。除了枪，试剂特别是水！另外还有你的pcr管这些都有可能！至于扩不出来，引物和反应 ...

谢谢您！我真觉得再卡在这老板就要开骂了，很多基因都是要慢慢试，但是因为这个就是最简单COX1基因，无论在国内或是国外我都很简单的做出来过。突然就不行了。

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Stop and stare

49楼2015-12-23 20:53:28

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