应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
55/1返回列表
查看: 4653  |  回复: 56
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)

[交流] 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 已有29人参与

LZ 在国外访问，做昆虫线粒体基因组的。
提完模板之后，扩增最简单的COX1基因，胶图如下
一个导致我做了20次PCR也没找到的问题

之后为了增加样本量，又提了两次也还好。后来突然有一次就开始出现拖带，并且不再出现原条带。而12S 基因扩增的很好，条带十分清晰。 为了查明是哪部分原因。
做了很多次PCR，可谓心力交瘁。
1.用了三台机器，排除机器原因。 2.更换premix，更换水，重新配置引物，无效果。 3.两种模板均出现此情况 4.作为negative，以水替代DNA的对照也出现同样的拖带。 5。12S可以稳定扩增。如图。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-1

今天换了一种新的模板作为对照，更加诡异。拖带和条带同时存在，而原模板和水仍然无条带，仅有拖带。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-2

我最不理解为什么新换的水里也有拖带，如有高手指教，不胜感激。

对不起我只有4.5个金币，还不能悬赏。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-3
1.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-4
2.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-5
601800125818983966.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
Stop and stare
1楼 2015-12-18 20:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
48楼: Originally posted by whitewave at 2015-12-23 18:23:56
我先说个让楼主感觉好点的事，我读硕士的时候曾经克隆一个昆虫基因6个月也没有成功！说点个人的建议，有人说枪污染，这个容易忽略。除了枪，试剂特别是水！另外还有你的pcr管这些都有可能！至于扩不出来，引物和反应 ...

谢谢您！我真觉得再卡在这老板就要开骂了，很多基因都是要慢慢试，但是因为这个就是最简单COX1基因，无论在国内或是国外我都很简单的做出来过。突然就不行了。
赞一下 回复此楼
Stop and stare
49楼2015-12-23 20:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 57 个回答

glove94

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

发自小木虫Android客户端
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2015-12-19 00:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:40
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2015-12-19 02:03:12
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by glove94 at 2015-12-19 00:51:44
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

哎、是啊..我不知道怎么办好了
赞一下 回复此楼
Stop and stare
4楼2015-12-19 18:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 57 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-27 6/300 2026-03-27 15:20 by caszguilin
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +7 曼111 2026-03-24 8/400 2026-03-27 13:53 by 杨杨杨紫
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:16 by JourneyLucky
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭