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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
43楼: Originally posted by 履霜 at 2015-12-23 12:29:14
easy，退火温度时间太短，扩增不完全导致涂抹带，怀疑污染的话，换水。

这样的话阴性对照也会出现拖带嘛？
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Stop and stare
51楼2015-12-23 21:25:07
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areslhr

铁虫 (小有名气)
如果有老师愿意为我解决这个问题，一定以十足感激之情相待，人在澳洲，有什么资料查不到的我都可以代为帮忙，分享昆士兰大学的各种资源。

我自己的分析如excel所示
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  • 附件 1 : 7号以来实验问题分析.xlsx
    • 2015-12-23 21:27:17, 10 K
Stop and stare
52楼2015-12-23 21:29:44
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
换引物

发自小木虫IOS客户端
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
53楼2015-12-23 21:49:29
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履霜

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
51楼: Originally posted by areslhr at 2015-12-23 21:25:07
这样的话阴性对照也会出现拖带嘛？...

水要DEPC处理，管子也是DEPC处理，在hood里面加样，加样之前照紫外。稀释引物的水也要DEPC的，Tips也是DEPC处理的。
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I measured love by the extent of my jealousy...
54楼2015-12-24 00:57:41
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履霜

木虫 (正式写手)
引用回帖:
51楼: Originally posted by areslhr at 2015-12-23 21:25:07
这样的话阴性对照也会出现拖带嘛？...

换水
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I measured love by the extent of my jealousy...
55楼2015-12-24 00:57:57
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a610291425

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看到你的总结感觉会对我有帮助，我也遇到过一次类似的问题，我排除实验做了十几次，能排查的都排查了，可实验问题就是解决不了，也认真总结过没有哪里出错，最后一位师姐让换个人试试，他说有时候实验就是那么神奇！结果换个人问题真就解决了，最终问题出在哪？到现在我也不明白，不妨你也试试！仅供参考
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56楼2015-12-24 11:44:17
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
46楼: Originally posted by stephenreal at 2015-12-23 17:23:47
客气了。
...

您好老师！

后来按您的说的做法。

发现只要是水、此对引物、premix 共存的情况下，就会出现拖带。 但是单独测试每一项都没发现问题， 确实很奇怪。

好在后来重新提取模板，虽然拖带依旧出现，但是目标条带非常亮，提纯之后拖带消失。
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Stop and stare
57楼2016-01-13 19:47:46
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