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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题
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areslhr

铁虫 (小有名气)

[交流] 一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 已有29人参与

LZ 在国外访问，做昆虫线粒体基因组的。
提完模板之后，扩增最简单的COX1基因，胶图如下
一个导致我做了20次PCR也没找到的问题

之后为了增加样本量，又提了两次也还好。后来突然有一次就开始出现拖带，并且不再出现原条带。而12S 基因扩增的很好，条带十分清晰。 为了查明是哪部分原因。
做了很多次PCR，可谓心力交瘁。
1.用了三台机器，排除机器原因。 2.更换premix，更换水，重新配置引物，无效果。 3.两种模板均出现此情况 4.作为negative，以水替代DNA的对照也出现同样的拖带。 5。12S可以稳定扩增。如图。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-1

今天换了一种新的模板作为对照，更加诡异。拖带和条带同时存在，而原模板和水仍然无条带，仅有拖带。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-2

我最不理解为什么新换的水里也有拖带，如有高手指教，不胜感激。

对不起我只有4.5个金币，还不能悬赏。

一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-3
1.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-4
2.jpg


一个导致我做了20次PCR也没找到的问题-5
601800125818983966.jpg
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Stop and stare
1楼 2015-12-18 20:07:29
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-21 15:02:52
1、确定你的模板和引物没有问题吗？
2、只用UV照射是不行的，UV只能破坏较大片段的核酸，对片段较小的核酸没有效果。做实验的台面要用百分之七十的乙醇全擦一遍，我们一般是用喷壶喷到台面上，然后再擦。

引物问题已确定没问题，今天新订的引物，现象依然。
更换模板后，确实出现了条带，但是拖带包括negetive 仍然出现。 在拖带中出现了清晰的条带，不知如何解释？
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Stop and stare
27楼2015-12-23 11:43:55
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glove94

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

发自小木虫Android客户端
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2015-12-19 00:51:44
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:40
本帖仅楼主可见
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3楼2015-12-19 02:03:12
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areslhr

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by glove94 at 2015-12-19 00:51:44
maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的

哎、是啊..我不知道怎么办好了
赞一下 回复此楼
Stop and stare
4楼2015-12-19 18:39:43
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