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一个导致我做了20次PCR也没找到的问题 已有29人参与
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LZ 在国外访问，做昆虫线粒体基因组的。 提完模板之后，扩增最简单的COX1基因，胶图如下  之后为了增加样本量，又提了两次也还好。后来突然有一次就开始出现拖带，并且不再出现原条带。而12S 基因扩增的很好，条带十分清晰。 为了查明是哪部分原因。 做了很多次PCR，可谓心力交瘁。 1.用了三台机器，排除机器原因。 2.更换premix，更换水，重新配置引物，无效果。 3.两种模板均出现此情况 4.作为negative，以水替代DNA的对照也出现同样的拖带。 5。12S可以稳定扩增。如图。  今天换了一种新的模板作为对照，更加诡异。拖带和条带同时存在，而原模板和水仍然无条带，仅有拖带。  我最不理解为什么新换的水里也有拖带，如有高手指教，不胜感激。 对不起我只有4.5个金币，还不能悬赏。  1.jpg  2.jpg  601800125818983966.jpg |
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谢谢。 今天刚刚订了新的引物，结果一样，排除了引物的问题。 也许我该试试纯水仅加引物，和纯水仅加DNTP和酶的MIX的情况。 |
stephenreal24楼2015-12-23 11:34:18
glove94
木虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-13 22:52:54
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maker没有拖带，胶和缓冲液应该是没有问题的 发自小木虫Android客户端 |
2楼2015-12-19 00:51:44
3楼2015-12-19 02:03:12
4楼2015-12-19 18:39:43
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