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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢？
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z631535213

木虫 (正式写手)
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20楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 13:42:09
一般跑20, 50bp的，我都用TAE 75v~80v 1h10分钟，3%的胶，有时4%
...

胶浓度高点好像是好些，前几次跑胶的时候用的是实验书上建议的2%，发现不太好，然后选用厂家说明书上的浓度

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21楼2015-12-17 13:45:57
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1202ld

新虫 (初入文坛)
肯定是要按照说明书上的，因为如果你跑不好它的产品不就没人买了吗？takara等等这些公司的产品目录有详细的片段大小与胶浓度选择方案，可以根据此选择与试验。

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22楼2015-12-17 13:49:20
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JULIA606

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 暮色西荷 at 2015-12-16 22:56:35
maker的大小是固定的，与胶浓度没有关系；maker跑不开可以多跑会或者换浓度大的胶

这不是前后矛盾了么。。。浓度。。
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23楼2015-12-17 17:58:20
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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10?: Originally posted by oliviashane at 2015-12-17 01:49:42
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...

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24楼2015-12-17 18:00:26
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JULIA606

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 07:03:30
我PCR产物长度为180bp左右，选用的Mark为50bp。胶用的2.5%，电压一般是按电极丝之间的距离来算。加热之前连瓶子带溶液称重一次，加热溶解结束后在称重，补水至原重量。加热的时候用保鲜膜密封单层，然后用移液枪头在 ...

今天也是这样做胶的，但感觉还是不太好：微波后胶依然有溢出量有减少，按重量补水后玻璃棒搅拌，感觉胶的状态不是很均匀，不知道是不是在凝的原因。还有什么建议吗？感谢赐教！
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25楼2015-12-17 18:20:07
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 07:06:47
还有不要用一次性手套，那是双层的，扎空的话加热过程中上下孔会移动，可以处理一下弄个单层的

之前用的一次性手套也是单层的，是透明的PE材质的那种，就是手套罩起来确实会积攒一些胶液
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26楼2015-12-17 18:22:11
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by lvsecaihong at 2015-12-17 09:11:51
我的片段在280bp左右，用的是2%的琼脂糖胶。效果还好。你加热溶琼脂糖的时候用锡纸包住瓶口，微波炉打两分钟就好，溶液少不了多少。

2min真心溶不彻底啊。。。多次加热溶胶后还是可见胶冻状的残留。。还是用锡纸封口后会有这种不一样的效果？
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27楼2015-12-17 18:24:23
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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15楼: Originally posted by joeming123 at 2015-12-17 12:04:00
用2%或者2.5%的琼脂糖胶（2g或2.5g胶粉+100ml 1xTAE）.煮沸几次，至胶溶液中没有固体为止。

用一般的电泳仪120v。1h左右就行。

今天试了2%琼脂糖胶（1.6g胶粉+80ml1*TAE），电压100V,跑了1H,结果ladder跑的根本不能看。。。
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28楼2015-12-17 18:26:25
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by JULIA606 at 2015-12-17 18:20:07
今天也是这样做胶的，但感觉还是不太好：微波后胶依然有溢出量有减少，按重量补水后玻璃棒搅拌，感觉胶的状态不是很均匀，不知道是不是在凝的原因。还有什么建议吗？感谢赐教！...

玻棒搅拌后放微波炉里再稍微加热下就可以了，溢出的话的人在旁边看着，看快溢出了就停止加热，2S后继续加热。我就是这样的。180ml的胶用锥形瓶加热，人都在微波炉边看着的，每次加热都有致密的气泡产生，容易溢出

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29楼2015-12-17 18:27:18
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JULIA606

新虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 12:50:10
50bp 胶浓度要3%或以上，不然成一堆分不开
...

“成一堆分不开”指的是ladder跑不开吗？可是之前1%的胶跑的确实比现在能看多了。。。我需要的鉴别条带差别70bp
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30楼2015-12-17 18:28:14
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