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JULIA606

新虫 (小有名气)

[求助] PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢? 已有7人参与

各位大侠,新手最近因实验需要基因鉴定进行PCR后电泳,目的基因在290-370bp之间,目前用的100bp ladder,1%琼脂糖,跑了几次后发现 ladder在目的段跑的不是很开,区分不大,不知道琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢?鉴于经验有限,再次请教各位,期待大家的建议与指导~~!~O(∩_∩)O~
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1202ld

新虫 (初入文坛)

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12楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 07:03:30
我PCR产物长度为180bp左右,选用的Mark为50bp。胶用的2.5%,电压一般是按电极丝之间的距离来算。加热之前连瓶子带溶液称重一次,加热溶解结束后在称重,补水至原重量。加热的时候用保鲜膜密封单层,然后用移液枪头在 ...

50bp 胶浓度要3%或以上,不然成一堆分不开

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17楼2015-12-17 12:50:10
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新虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by 梦幻小豚豚 at 2015-12-17 12:40:30
我的大概是400bp,用多大的胶跑合适?...

你对比哪个marker有400bp条带的,就用该marker适合的浓度,一般说明书都有,takara的在其官网上有,

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18楼2015-12-17 12:51:53
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 13:02:31
TBE+80分钟120V跑胶。最近每天跑两个胶
...

一般跑20, 50bp的,我都用TAE 75v~80v 1h10分钟,3%的胶,有时4%

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20楼2015-12-17 13:42:09
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1202ld

新虫 (初入文坛)

肯定是要按照说明书上的,因为如果你跑不好它的产品不就没人买了吗?takara等等这些公司的产品目录有详细的片段大小与胶浓度选择方案,可以根据此选择与试验。

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22楼2015-12-17 13:49:20
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新虫 (初入文坛)

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30楼: Originally posted by JULIA606 at 2015-12-17 18:28:14
“成一堆分不开”指的是ladder跑不开吗?可是之前1%的胶跑的确实比现在能看多了。。。我需要的鉴别条带差别70bp...

这里的50 bp指的是50bp 的marker

发自小木虫Android客户端
31楼2015-12-17 19:54:53
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