24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3804  |  回复: 44
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

JULIA606

新虫 (小有名气)

[求助] PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢?已有7人参与

各位大侠,新手最近因实验需要基因鉴定进行PCR后电泳,目的基因在290-370bp之间,目前用的100bp ladder,1%琼脂糖,跑了几次后发现 ladder在目的段跑的不是很开,区分不大,不知道琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢?鉴于经验有限,再次请教各位,期待大家的建议与指导~~!~O(∩_∩)O~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我PCR产物长度为180bp左右,选用的Mark为50bp。胶用的2.5%,电压一般是按电极丝之间的距离来算。加热之前连瓶子带溶液称重一次,加热溶解结束后在称重,补水至原重量。加热的时候用保鲜膜密封单层,然后用移液枪头在保鲜膜上扎洞保持和外界大气压相通

发自小木虫IOS客户端
12楼2015-12-17 07:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

还有不要用一次性手套,那是双层的,扎空的话加热过程中上下孔会移动,可以处理一下弄个单层的

发自小木虫IOS客户端
13楼2015-12-17 07:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 12:50:10
50bp 胶浓度要3%或以上,不然成一堆分不开
...

TBE+80分钟120V跑胶。最近每天跑两个胶

发自小木虫IOS客户端
19楼2015-12-17 13:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 13:42:09
一般跑20, 50bp的,我都用TAE 75v~80v 1h10分钟,3%的胶,有时4%
...

胶浓度高点好像是好些,前几次跑胶的时候用的是实验书上建议的2%,发现不太好,然后选用厂家说明书上的浓度

发自小木虫IOS客户端
21楼2015-12-17 13:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
25楼: Originally posted by JULIA606 at 2015-12-17 18:20:07
今天也是这样做胶的,但感觉还是不太好:微波后胶依然有溢出量有减少,按重量补水后玻璃棒搅拌,感觉胶的状态不是很均匀,不知道是不是在凝的原因。还有什么建议吗?感谢赐教!...

玻棒搅拌后放微波炉里再稍微加热下就可以了,溢出的话的人在旁边看着,看快溢出了就停止加热,2S后继续加热。我就是这样的。180ml的胶用锥形瓶加热,人都在微波炉边看着的,每次加热都有致密的气泡产生,容易溢出

发自小木虫IOS客户端
29楼2015-12-17 18:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 JULIA606 的主题更新
信息提示
请填处理意见