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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢？
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
片段小用浓度大的胶，片段大用稀一点儿的胶。

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11楼2015-12-17 02:19:17
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z631535213

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我PCR产物长度为180bp左右，选用的Mark为50bp。胶用的2.5%，电压一般是按电极丝之间的距离来算。加热之前连瓶子带溶液称重一次，加热溶解结束后在称重，补水至原重量。加热的时候用保鲜膜密封单层，然后用移液枪头在保鲜膜上扎洞保持和外界大气压相通

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12楼2015-12-17 07:03:30
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z631535213

木虫 (正式写手)
还有不要用一次性手套，那是双层的，扎空的话加热过程中上下孔会移动，可以处理一下弄个单层的

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13楼2015-12-17 07:06:47
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lvsecaihong

铜虫 (小有名气)
我的片段在280bp左右，用的是2%的琼脂糖胶。效果还好。你加热溶琼脂糖的时候用锡纸包住瓶口，微波炉打两分钟就好，溶液少不了多少。
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奋斗中的小虫
14楼2015-12-17 09:11:51
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joeming123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用2%或者2.5%的琼脂糖胶（2g或2.5g胶粉+100ml 1xTAE）.煮沸几次，至胶溶液中没有固体为止。

用一般的电泳仪120v。1h左右就行。
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现在的路越来越难走
15楼2015-12-17 12:04:00
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梦幻小豚豚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by oliviashane at 2015-12-16 01:44:37
膠的?舛扰c目的基因的大小有關，bp數大的用?舛鹊偷哪z跑，阻力小跑的快，反之bp數小的就用高?舛鹊哪z，跑得慢，條帶分離的清楚。

我的大概是400bp,用多大的胶跑合适？
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16楼2015-12-17 12:40:30
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1202ld

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 07:03:30
我PCR产物长度为180bp左右，选用的Mark为50bp。胶用的2.5%，电压一般是按电极丝之间的距离来算。加热之前连瓶子带溶液称重一次，加热溶解结束后在称重，补水至原重量。加热的时候用保鲜膜密封单层，然后用移液枪头在 ...

50bp 胶浓度要3%或以上，不然成一堆分不开

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17楼2015-12-17 12:50:10
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1202ld

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 梦幻小豚豚 at 2015-12-17 12:40:30
我的大概是400bp,用多大的胶跑合适？...

你对比哪个marker有400bp条带的，就用该marker适合的浓度，一般说明书都有，takara的在其官网上有，

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18楼2015-12-17 12:51:53
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 1202ld at 2015-12-17 12:50:10
50bp 胶浓度要3%或以上，不然成一堆分不开
...

TBE+80分钟120V跑胶。最近每天跑两个胶

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19楼2015-12-17 13:02:31
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1202ld

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by z631535213 at 2015-12-17 13:02:31
TBE+80分钟120V跑胶。最近每天跑两个胶
...

一般跑20, 50bp的，我都用TAE 75v~80v 1h10分钟，3%的胶，有时4%

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20楼2015-12-17 13:42:09
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