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JULIA606

新虫 (小有名气)

[求助] PCR后琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢?已有7人参与

各位大侠,新手最近因实验需要基因鉴定进行PCR后电泳,目的基因在290-370bp之间,目前用的100bp ladder,1%琼脂糖,跑了几次后发现 ladder在目的段跑的不是很开,区分不大,不知道琼脂糖凝胶电泳的胶浓度与DNA ladder 大小有什么关系呢?鉴于经验有限,再次请教各位,期待大家的建议与指导~~!~O(∩_∩)O~
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joeming123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用2%或者2.5%的琼脂糖胶(2g或2.5g胶粉+100ml 1xTAE).煮沸几次,至胶溶液中没有固体为止。

用一般的电泳仪120v。1h左右就行。
现在的路越来越难走
15楼2015-12-17 12:04:00
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joeming123

银虫 (小有名气)

引用回帖:
28楼: Originally posted by JULIA606 at 2015-12-17 18:26:25
今天试了2%琼脂糖胶(1.6g胶粉+80ml1*TAE),电压100V,跑了1H,结果ladder跑的根本不能看。。。...

胶有煮好么? 一般是煮到没有可见固体,像你这样,总是看不清ladder,不妨试试 多煮沸几次。  还有胶粉最好买点,比较好的。
现在的路越来越难走
43楼2015-12-18 16:17:52
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joeming123

银虫 (小有名气)

引用回帖:
34楼: Originally posted by chenllili at 2015-12-18 00:06:55
100ml,用250ml蓝盖瓶盖盖微波慢慢溶解,不会损失水分。
...

煮100ml的胶, 你就倒120ml做哟的TAE啊。 这个没事的,多点少点,影响不大。
现在的路越来越难走
44楼2015-12-18 16:19:11
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