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qian0717

新虫 (小有名气)

[求助] 用于rna提取的动物样本怎么保存 已有2人参与

我提的是虫子的Rna,虫子很小,大概2mm长,0.5mm宽。每个样本30只,大概2mg。
参考了相关文献的保存方法,液氮速冻再放-80。具体操作是:取样时,我把虫子放到EP管里,再把EP管插到浮板上,再把浮板放到液氮里,2分钟后转移到—80度冰箱保存。

提rna时,同时提了新鲜的样本和冻存的样本,跑胶发现冻存样本rna的条带有些拖尾,这说明rna有降解?是保存的方法不对吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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lsl635600374

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我提虫子RNA一般都提的时候直接加trizol研磨的
你提的RNA三条带亮度怎么样呢
我们用多一点点的辛苦,来交换多一点点的幸福。
2楼2015-12-05 21:38:02
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KOP利

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA类实验正确的样本采集及保存方法,如下可供你参考:取新鲜组织(注:生物体死亡后10分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。匀浆的裂解液4℃短期保存(1个月),-20度或- 70℃长期保存。
YNWA!
3楼2015-12-07 10:32:10
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qian0717

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-05 21:38:02
我提虫子RNA一般都提的时候直接加trizol研磨的
你提的RNA三条带亮度怎么样呢


您好
我是用天根的离心柱型试剂盒提的
没有5s,28s约是18s的2倍
4楼2015-12-09 12:02:19
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qian0717

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by qian0717 at 2015-12-09 12:02:19
http://pan.baidu.com/s/1pK6ugL9
您好
我是用天根的离心柱型试剂盒提的
没有5s,28s约是18s的2倍...

5楼2015-12-09 12:04:03
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林之子云

新虫 (初入文坛)

6楼2015-12-09 13:17:05
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qian0717

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 林之子云 at 2015-12-09 13:17:05
楼主是搞寄生虫的吗?

不是~
7楼2015-12-09 18:41:36
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qian0717

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-05 21:38:02
我提虫子RNA一般都提的时候直接加trizol研磨的
你提的RNA三条带亮度怎么样呢

请帮我看看电泳图吧,不太懂。RNA是否降解了,条带周围的弥散是怎么回事?
我用的是1.2%的胶,1XTAE,160v,10min。点了DNAmarker,100, 250, 500, 750, 1000, 2000bp,最亮带750bp。

第一张图是提完之后立即跑的电泳,感觉上样量多了。【从左到右依次是新鲜组织、冻存组织】
第二张图是减少上样量又跑了一次。【从左到右依次是新鲜组织、冻存组织、另一个新鲜组织】
第三张图是把胶放了一夜,又拍了照,想看看会不会降解,发现条带模糊了,但DNAmarker也模糊了。【从左到右依次是新鲜组织、冻存组织、另一个新鲜组织】
用于rna提取的动物样本怎么保存
0-0.JPG


用于rna提取的动物样本怎么保存-1
1.JPG


用于rna提取的动物样本怎么保存-2
2.JPG

8楼2015-12-09 18:45:00
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lsl635600374

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by qian0717 at 2015-12-09 18:45:00
请帮我看看电泳图吧,不太懂。RNA是否降解了,条带周围的弥散是怎么回事?
我用的是1.2%的胶,1XTAE,160v,10min。点了DNAmarker,100, 250, 500, 750, 1000, 2000bp,最亮带750bp。

第一张图是提完之后立即跑的 ...

第一张图能看出5S,上样量是挺多的,第一二张看出28S弥散,应该是降解了,第三张图放置过夜确实是降解了
还有,你电泳条件160V太高了吧,我一般120V 20-25min
另外,RNA完整性检测时没必要加DNA Marker
我们用多一点点的辛苦,来交换多一点点的幸福。
9楼2015-12-10 18:02:36
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