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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序无结果是什么情况? 已有8人参与

做了质粒构建,转化涂板,挑了单克隆摇菌后把菌液送去测序,结果测序都失败了,测序公司给的回复如图。哪位大神能指点一下是哪里出错了

测序无结果是什么情况?
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测序无结果是什么情况?-1
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
12楼2015-11-26 13:53:11
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 温室里的杂草 at 2015-11-25 19:51:17
但是即使是没有把目的基因插进去,测序的时候应该也会有载体的序列吧,不可能什么都没有啊...

如果连质粒都没有转进去的话也不会有载体序列的,我之前也出现过这种情况。
5楼2015-11-25 20:34:57
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djbitter

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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温室里的杂草: 金币+3, 有帮助 2015-11-25 21:22:35
选用载体是否正确;确保培养板抗性没有失效、培养时间没有过久;单克隆PCR鉴定可以用载体多克隆位点上下游引物(即使空载体也能扩增出条带)、基因特异引物;进一步确认,阳性克隆质粒酶切鉴定;还有可能,测序公司出错。
6楼2015-11-25 20:53:03
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misang

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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温室里的杂草: 金币+1, 有帮助 2015-11-26 12:13:32
温室里的杂草: 金币+3, 有帮助 2015-11-26 15:23:53
可能是假阳性克隆,重新挑吧

发自小木虫Android客户端
7楼2015-11-25 23:21:12
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zy_zhaoyuan

铁虫 (初入文坛)

测序样品浓度过低也有可能测不到信号

发自小木虫Android客户端
8楼2015-11-25 23:36:01
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juzhixianwei

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序前质粒测浓度了没?是不是提取的有问题
9楼2015-11-25 23:43:18
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普通回帖

温室里的杂草

新虫 (初入文坛)

帖子不要沉啊
2楼2015-11-25 19:36:40
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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温室里的杂草: 金币+1 2015-11-25 19:51:39
个人觉得你没有把目的基因克隆进去,建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下,这样可以保证你的目的基因放进去了。
3楼2015-11-25 19:46:34
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-11-25 19:46:34
个人觉得你没有把目的基因克隆进去,建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下,这样可以保证你的目的基因放进去了。

但是即使是没有把目的基因插进去,测序的时候应该也会有载体的序列吧,不可能什么都没有啊
4楼2015-11-25 19:51:17
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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温室里的杂草: 金币+3, 有帮助 2015-11-26 12:15:27
一般送去测序的样品首先要做个PCR筛选,确定有片段连上,而不是没做任何检测直接就送样。测序没结果的话,应是公司方面的问题。
另外,测序最好自己做PCR反应,过柱纯化后送去直接读结果。
10楼2015-11-26 08:44:22
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