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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 测序无结果是什么情况？
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by juzhixianwei at 2015-11-25 23:43:18
测序前质粒测浓度了没？是不是提取的有问题

我是把菌液直接送去测序的，没有提质粒
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11楼2015-11-26 12:14:22
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匿名

用户注销 (正式写手)
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12楼2015-11-26 13:53:11
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wjasaa

金虫 (初入文坛)
送测前自己筛选一下菌落，可以通过菌液PCR和提质粒酶切的方式，另外检查一下你的方案和载体是否正确。

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13楼2015-11-26 13:58:23
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by misang at 2015-11-25 23:21:12
可能是假阳性克隆，重新挑吧

造成假阳性克隆的原因可能有哪些呢？有可能是因为感受态细胞活性的原因吗？
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14楼2015-11-26 15:23:08
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by juzhixianwei at 2015-11-25 23:43:18
测序前质粒测浓度了没？是不是提取的有问题

我是送菌液去测序的
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15楼2015-11-26 15:53:40
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)

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★
感谢参与，应助指数 +1
温室里的杂草(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:30:30
送样测序之前做一次菌液PCR检测一下，如果担心是测序公司的问题，可以送空载体测序，PET-28算低拷贝载体，质粒浓度一般比较低，但也不至于无信号。
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
16楼2015-11-27 09:24:25
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145457367

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-11-25 19:46:34
个人觉得你没有把目的基因克隆进去，建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下，这样可以保证你的目的基因放进去了。

用自己设计的引物测不出序列，用通用性引物就可以测出来是怎么回事？菌液pcr是有目的条带的，酶切验证又没有条带。
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17楼2015-11-27 13:41:46
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-27 13:41:46
用自己设计的引物测不出序列，用通用性引物就可以测出来是怎么回事？菌液pcr是有目的条带的，酶切验证又没有条带。...

首先，菌液或者菌落PCR最好用载体中的一段加目的基因一段进行扩增；酶切验证没有条带的话你要确定你的载体构建有没有问题，是不是选错了酶切位点；没有明白用自己设计的引物测不出序列和用通用引物可以测出来是怎么回事，如果你用通用引物可以测出来那不就行了
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18楼2015-11-27 16:48:46
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blueatx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
温室里的杂草(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:30:41
你用什么引物测序呢？通用的还是PCR的？要是PCR的引物可能就是没连上，建议先验证一下看看是不是假阳性
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19楼2015-12-03 09:08:13
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lipo2014

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
温室里的杂草(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:30:49
确实就算没插进去目的片段也应该有测序结果的，楼主你有没有问测序公司是怎么给你提的质粒啊，还有浓度什么的，引物如果是通用引物的话就可以排除引物的问题了，只能是菌或者质粒本身的问题，会不会是楼主的菌被杂菌污染了啊？仅个人猜测。。。。
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20楼2016-01-05 15:13:21
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