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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 测序无结果是什么情况？
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序无结果是什么情况？ 已有8人参与

做了质粒构建，转化涂板，挑了单克隆摇菌后把菌液送去测序，结果测序都失败了，测序公司给的回复如图。哪位大神能指点一下是哪里出错了

测序无结果是什么情况？
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测序无结果是什么情况？-1
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1楼 2015-11-25 19:26:46
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 145457367 at 2015-11-27 13:41:46
用自己设计的引物测不出序列，用通用性引物就可以测出来是怎么回事？菌液pcr是有目的条带的，酶切验证又没有条带。...

首先，菌液或者菌落PCR最好用载体中的一段加目的基因一段进行扩增；酶切验证没有条带的话你要确定你的载体构建有没有问题，是不是选错了酶切位点；没有明白用自己设计的引物测不出序列和用通用引物可以测出来是怎么回事，如果你用通用引物可以测出来那不就行了
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18楼2015-11-27 16:48:46
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
帖子不要沉啊
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2楼2015-11-25 19:36:40
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
温室里的杂草: 金币+1 2015-11-25 19:51:39
个人觉得你没有把目的基因克隆进去，建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下，这样可以保证你的目的基因放进去了。
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3楼2015-11-25 19:46:34
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-11-25 19:46:34
个人觉得你没有把目的基因克隆进去，建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下，这样可以保证你的目的基因放进去了。

但是即使是没有把目的基因插进去，测序的时候应该也会有载体的序列吧，不可能什么都没有啊
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4楼2015-11-25 19:51:17
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