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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 测序无结果是什么情况？
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序无结果是什么情况？ 已有8人参与

做了质粒构建，转化涂板，挑了单克隆摇菌后把菌液送去测序，结果测序都失败了，测序公司给的回复如图。哪位大神能指点一下是哪里出错了

测序无结果是什么情况？
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测序无结果是什么情况？-1
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1楼 2015-11-25 19:26:46
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djbitter

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
温室里的杂草: 金币+3, ★有帮助 2015-11-25 21:22:35
选用载体是否正确；确保培养板抗性没有失效、培养时间没有过久；单克隆PCR鉴定可以用载体多克隆位点上下游引物（即使空载体也能扩增出条带）、基因特异引物；进一步确认，阳性克隆质粒酶切鉴定；还有可能，测序公司出错。
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6楼2015-11-25 20:53:03
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
帖子不要沉啊
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2楼2015-11-25 19:36:40
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
温室里的杂草: 金币+1 2015-11-25 19:51:39
个人觉得你没有把目的基因克隆进去，建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下，这样可以保证你的目的基因放进去了。
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3楼2015-11-25 19:46:34
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温室里的杂草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2015-11-25 19:46:34
个人觉得你没有把目的基因克隆进去，建议做完转化长菌后挑单克隆做下菌落PCR或者酶切看下，这样可以保证你的目的基因放进去了。

但是即使是没有把目的基因插进去，测序的时候应该也会有载体的序列吧，不可能什么都没有啊
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4楼2015-11-25 19:51:17
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