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Deng_Cheng铁虫 (小有名气)
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[求助]
IPTG诱导蛋白表达 已有3人参与
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1. 当OD=0.6左右时，加入IPTG诱导目的基因的表达，如果设置对照为不加入IPTG，则对照组经过相同的诱导条件后，菌液发生了什么变化，是一直在繁殖吗？ 2. 原核表达时，IPTG诱导时，如何设置对照？ |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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我认为，对照应为空载质粒，而不是不加IPTG,原因如下： 1.IPTG会抑制细胞生长，以不加IPTG为对照，那么对照组和实验组的菌体生长不同步，在以后全细胞蛋白分析中，大肠杆菌自身的蛋白会有较大差异，影响判断。 2.培养基中成分复杂，比如LB培养基中的酵母抽提物含有少量乳糖，就算不加IPTG，蛋白也会被乳糖诱导，导致蛋白分析时背景表达影响实验结果。 3.以空载载体做空白，对照和实验组都加IPTG，那么实验中的变量就是有无目的基因的表达。这样就不存在蛋白的背景表达，之后的蛋白分析就十分方便且清晰，并且可以评估外源蛋白表达对菌体生长的影响。 [ 发自小木虫客户端 ] |
9楼2015-10-21 15:35:56
2楼2015-10-19 13:23:48
Deng_Cheng
铁虫 (小有名气)
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3楼2015-10-19 15:08:50
4楼2015-10-19 17:40:39