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lrbs521

新虫 (初入文坛)

[交流] RT-PCR产物电泳条带不均一,总是两边很亮中间暗,有狗骨头现象,求助各位坛友 已有2人参与

RT-PCR产物电泳条带总是两边很亮中间暗,胶是1.5%的胶,B-actin 是240bp,目的是333bp,电泳液是TAE,电压120V,电流130ma(恒流,实际是是80V左右,130ma恒流B-actin和目的条带都有这种情况,如图:

RT-PCR产物电泳条带不均一,总是两边很亮中间暗,有狗骨头现象,求助各位坛友
RT-PCR产物电泳条带不均一,总是两边很亮中间暗,有狗骨头现象,求助各位坛友-1
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evangelina

无虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
狗骨头现象,哈哈,好形象的说法

这个狗骨头现象原因大概是因为加样品的well收缩了(特别是因为你用较高浓度的胶)

要避免这个现象很简单,

你可以把做好的胶,在未跑之前,先泡进缓冲液池里面(最有效的办法)

用细长的梳子容易出现狗骨头现象,用宽厚的比较不容易,不过条带也会变宽

加的样品量多点也比较不容易出现狗骨头现象
2楼2015-09-26 08:50:23
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lrbs521

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-26 08:50:23
狗骨头现象,哈哈,好形象的说法

这个狗骨头现象原因大概是因为加样品的well收缩了(特别是因为你用较高浓度的胶)

要避免这个现象很简单,

你可以把做好的胶,在未跑之前,先泡进缓冲液池里面(最有效的办 ...

我一会儿试试。我一般胶都是现用现配,凝了就拔梳子上样。从倒完胶到上样也就间隔半小时吧,加样孔会收缩的那么快吗?我做了十几次了,几乎每次都有这种情况。上样孔大、中、小都试过了,电泳液也是新换的,电压、电流降到100,加样手法也换过了,还是不怎么好。我真想不出啥原因了,求大神指点迷津啊
3楼2015-09-26 14:37:17
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-26 08:50:23
狗骨头现象,哈哈,好形象的说法

这个狗骨头现象原因大概是因为加样品的well收缩了(特别是因为你用较高浓度的胶)

要避免这个现象很简单,

你可以把做好的胶,在未跑之前,先泡进缓冲液池里面(最有效的办 ...

正解  我们就这这样做的
生命不息奋斗不止
4楼2015-09-26 17:22:41
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