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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR阴性对照有目标条带是什么情况
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厮杀的山羊

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR阴性对照有目标条带是什么情况 已有2人参与

各位大神好，我最近在做RT-PCR，RNA提取和逆转录应该都没有问题，但是用逆转录得到的cDNA作模板跑出来的pcr电泳，阴性对照始终有条带；
如图，从左至右，第二个和第六个为阴性对照（用水替代模板，其它一样），但是阴性对照也有带，且位置和亮度与加模板p出来的产物基本一致，条带大小大概100bp左右。这种情况已经反复出现多次，引物以及pcr体系的各种试剂我都换新了但阴性对照还是有带。
因为产物表达量很低，所以本人怀疑目标基因没有p出来，现在出现的条带是引物部分扩增出来的，请问这样理解对吗？希望大家能指点一二，谢谢了！（这是我第一次在木虫上发帖，所以没办法给大家太多金币，希望能谅解）

RT-PCR阴性对照有目标条带是什么情况
图片1.png
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1楼 2015-08-17 20:28:14
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小于一百的带，估计是引物二聚体吧
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2楼2016-01-11 22:47:50
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

设计引物的时候应该有目的片段大小的，只要看有没有符合大小的带就好了，别的不重要
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3楼2016-01-11 22:48:52
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candy521521

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

低于100bp有可能是引物二聚体，可以提高退火温度或是降低引物的上样量，也有可能是DNA污染哦。每次跑之前先洗干净槽子还要把里面的液体换新的，不要混用
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4楼2016-01-12 22:44:26
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