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厮杀的山羊

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR阴性对照有目标条带是什么情况 已有2人参与

各位大神好,我最近在做RT-PCR,RNA提取和逆转录应该都没有问题,但是用逆转录得到的cDNA作模板跑出来的pcr电泳,阴性对照始终有条带;
如图,从左至右,第二个和第六个为阴性对照(用水替代模板,其它一样),但是阴性对照也有带,且位置和亮度与加模板p出来的产物基本一致,条带大小大概100bp左右。这种情况已经反复出现多次,引物以及pcr体系的各种试剂我都换新了但阴性对照还是有带。
因为产物表达量很低,所以本人怀疑目标基因没有p出来,现在出现的条带是引物部分扩增出来的,请问这样理解对吗?希望大家能指点一二,谢谢了!(这是我第一次在木虫上发帖,所以没办法给大家太多金币,希望能谅解

RT-PCR阴性对照有目标条带是什么情况
图片1.png
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

设计引物的时候应该有目的片段大小的,只要看有没有符合大小的带就好了,别的不重要
3楼2016-01-11 22:48:52
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小于一百的带,估计是引物二聚体吧
2楼2016-01-11 22:47:50
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candy521521

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

低于100bp有可能是引物二聚体,可以提高退火温度或是降低引物的上样量,也有可能是DNA污染哦。每次跑之前先洗干净槽子还要把里面的液体换新的,不要混用
4楼2016-01-12 22:44:26
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