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lrbs521

新虫 (初入文坛)

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[交流] RT-PCR产物电泳条带不均一，总是两边很亮中间暗，有狗骨头现象，求助各位坛友已有2人参与

RT-PCR产物电泳条带总是两边很亮中间暗，胶是1.5%的胶，B-actin 是240bp，目的是333bp，电泳液是TAE，电压120V，电流130ma（恒流，实际是是80V左右，130ma恒流B-actin和目的条带都有这种情况，如图：

RT-PCR产物电泳条带不均一，总是两边很亮中间暗，有狗骨头现象，求助各位坛友-1

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1楼 2015-09-26 00:02:05

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evangelina

无虫 (小有名气)

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★
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狗骨头现象，哈哈，好形象的说法

这个狗骨头现象原因大概是因为加样品的well收缩了（特别是因为你用较高浓度的胶）

要避免这个现象很简单，

你可以把做好的胶，在未跑之前，先泡进缓冲液池里面（最有效的办法）

用细长的梳子容易出现狗骨头现象，用宽厚的比较不容易，不过条带也会变宽

加的样品量多点也比较不容易出现狗骨头现象

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2楼2015-09-26 08:50:23

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lrbs521

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-26 08:50:23
狗骨头现象，哈哈，好形象的说法

这个狗骨头现象原因大概是因为加样品的well收缩了（特别是因为你用较高浓度的胶）

要避免这个现象很简单，

你可以把做好的胶，在未跑之前，先泡进缓冲液池里面（最有效的办 ...

我一会儿试试。我一般胶都是现用现配，凝了就拔梳子上样。从倒完胶到上样也就间隔半小时吧，加样孔会收缩的那么快吗？我做了十几次了，几乎每次都有这种情况。上样孔大、中、小都试过了，电泳液也是新换的，电压、电流降到100，加样手法也换过了，还是不怎么好。我真想不出啥原因了，求大神指点迷津啊

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3楼2015-09-26 14:37:17

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