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lggd2013银虫 (初入文坛)
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[求助]
RT-PCR
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 这是总RNA电泳图（非变性琼脂糖凝胶电泳） 用omega总RNA试剂盒提取  这从右到左分别是cDNA、PCR产物1、PCR产物2、PCR产物3（非变性琼脂糖凝胶电泳） PCR产物1、2、3是相同的锚定引物，不同随机引物 RT反转录是omega的M-MLV First Strand cDNA Synthesis Kit 体系为（试剂盒说明书）：总RNA 1ul oligo（dT）15 1ul 10mM dNTP mix 1ul Nuclease-Free Water 15ul 65度孵育5分钟，冰上速冷2分钟以上 5×RT Buff 5ul M-MLV Reverase Transcriptase 1ul RNase Inhibitor 1ul 42度反应60分钟 ，85度反应5分钟完成 PCR 3dH2O 20ul 模板cDNA 2ul 锚定引物 1ul 随机引物 1ul taq master mix 6ul 混匀后 95℃ 预变性 5min 95℃ 变性 45s 42℃ 复性 45s }40循环 72℃ 延伸 90s 分子小白求问总RNA和cDNA质量怎么样？PCR产物怎么样？PCR效果与退火温度关系怎么样？如何优化PCR参数与体系？ |
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