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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB 一抗和二抗问题
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彩虹之子1991

铜虫 (正式写手)

[求助] WB 一抗和二抗问题 已有2人参与

SDS-PAGE的样品已经完全失去生物活性 就是说煮沸之后  既然没有活性了  那怎么做WB  一抗和二抗又是怎么结合的? (如果我表达的蛋白是一抗的话)
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如果说我是天才的话，请叫我努力型的天才。
1楼 2015-09-21 10:21:33
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做WB，是想看看是否有蛋白表达，没有活性的事，这时候不需要活性。。。建议你找WB的资料看看，尤其是WB的原理，，，推荐两篇资料，http://www.detaibio.com/material-downloads.html，WB的基本原理，，，
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2楼2015-09-21 17:20:33
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
WB抗体识别一级结构，不看二级结构和三级结构
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2015-09-22 08:01:10
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彩虹之子1991

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by MarchZR at 2015-09-21 17:20:33
做WB，是想看看是否有蛋白表达，没有活性的事，这时候不需要活性。。。建议你找WB的资料看看，尤其是WB的原理，，，推荐两篇资料，http://www.detaibio.com/material-downloads.html，WB的基本原理，，，...

如果没有活性了 抗体怎么还能识别蛋白难道是只识别几个小肽段吗?
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如果说我是天才的话，请叫我努力型的天才。
4楼2015-09-22 10:05:01
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彩虹之子1991

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-09-22 08:01:10
WB抗体识别一级结构，不看二级结构和三级结构

不是有线性表位和空间表位吗? 难道抗体只识别线性表位吗>?
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如果说我是天才的话，请叫我努力型的天才。
5楼2015-09-22 10:06:57
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 彩虹之子1991 at 2015-09-22 10:05:01
如果没有活性了 抗体怎么还能识别蛋白难道是只识别几个小肽段吗?...

抗体识别蛋白不是靠活性啊，是因为蛋白带了标签啊，带标签的蛋白才能做WB，才能被抗体特异性结合，，，，，建议你还是仔细深究一下WB原理吧
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6楼2015-09-22 14:50:05
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 彩虹之子1991 at 2015-09-22 10:05:01
如果没有活性了 抗体怎么还能识别蛋白难道是只识别几个小肽段吗?...

不是识别几个小肽段，而是和蛋白上的标签结合，我们常用的也就是his和gst标签。。。。。不管蛋白的活性
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7楼2015-09-22 14:51:24
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