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[求助]
关于western blot的问题一大堆，求给位帮忙解答下。 已有1人参与
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做wb的问题实在是令人费解。所以将想请论坛里的隐士和大牛帮一帮小弟。实在是感激不尽啊！ 1.同时做5张膜，在同样的条件下做，显色时，有的膜有清晰的条带，而有的膜整张都亮，没有条带。 2.膜回收后处理，用30%双氧水处理20min(避光浸泡上上下摇床)，重新孵育内参的一抗。有的时候可以显出弱弱的条带，有的时候膜不亮，但发光液亮？（真是奇怪！发光液亮与盛放发光液的盒子的干净与否有关系吗？我觉得不会吧，难道不干净时有HRP？）还想请问下。双氧水对蛋白质的作用究竟是什么？如果是氧化作用使蛋白变性的话，那抗原不也一起都变性了？那后面还怎么孵育？ 3.还是2的补充：一般公司卖的洗脱液里的成分是什么？其洗脱的原理是什么？ 4.另外一个是我没想通的，既然二抗标记的是HRP，可以用DAB显色，那为什么还要那么麻烦的用ECL法呢？这两者的在定量分析时的区别在哪里？ 就先问到这里吧，也不知道有没有好心的大牛帮忙解答下。小弟苦等啊··· |
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