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关于western blot的问题一大堆，求给位帮忙解答下之2（补充） 已有1人参与
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发完第一个帖子，就又想到了一大堆的问题。再补刀一下。望大牛们的解答！ 1.在SDS-PAGE电泳时， 分离胶的 浓度与分离的蛋白质大小的关系是怎么样的？另外，我如果分离一个225KD的蛋白，用8%的分离胶，另外我还需要检测一个35KD的蛋白，会不会影响很大？ 2.为什么浓缩胶基本上都是4%的？这是经验所得？还是有一定原理？ 3.公司卖的MARKER，可以自己做吗？为什么marker上有的蛋白可以显出颜色？（我猜测公司是将不同大小的蛋白分开提纯的，对其中一部分蛋白用染料结合。最后混匀出售？不知道有没有道理？） 4.蛋白的上样量是不是根据蛋白的浓度确定的？一般蛋白的浓度需要在多少可以显出适当的颜色？（或者说其浓度要视蛋白的抗原表位的多上也就是一抗对此的效价多少来单独确定？） 就是这些了。小弟还在大二，跟着老师做实验，可以老师每天都很忙，一问问题，老师就说自己去查。可是度娘不太靠谱，搜出来的都不是我想问的。简直是浪费我时间。这些问题又没有人提问过，少有人知道。实验室里的其他伙伴更是一问三不知。做这个实验心太累了（从暑假开始一直在做，每天就这样单调的重复着，一点希望的影子都看不到，我觉得自己已经很有耐心了吧？）。没有人知道。照着步骤做（因为这还是预实验，很多条件都还在摸索中，有种盲人摸象的感觉），又常常出现问题。每一次失败，都会很沮丧。 小弟又不知道该怎样去分析问题。从来没人教过，老师总是匆匆出现问几个问题，变一个条件又接着做，我简直无语到底。查资料又该如何开始呢?真希望有一位大神来指点下小弟。小弟实在困惑啊！ |
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