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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于western blot的问题一大堆，求给位帮忙解答下。
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于western blot的问题一大堆，求给位帮忙解答下。 已有1人参与

做wb的问题实在是令人费解。所以将想请论坛里的隐士和大牛帮一帮小弟。实在是感激不尽啊！
1.同时做5张膜，在同样的条件下做，显色时，有的膜有清晰的条带，而有的膜整张都亮，没有条带。
2.膜回收后处理，用30%双氧水处理20min(避光浸泡上上下摇床)，重新孵育内参的一抗。有的时候可以显出弱弱的条带，有的时候膜不亮，但发光液亮？（真是奇怪！发光液亮与盛放发光液的盒子的干净与否有关系吗？我觉得不会吧，难道不干净时有HRP？）还想请问下。双氧水对蛋白质的作用究竟是什么？如果是氧化作用使蛋白变性的话，那抗原不也一起都变性了？那后面还怎么孵育？
3.还是2的补充：一般公司卖的洗脱液里的成分是什么？其洗脱的原理是什么？
4.另外一个是我没想通的，既然二抗标记的是HRP，可以用DAB显色，那为什么还要那么麻烦的用ECL法呢？这两者的在定量分析时的区别在哪里？
就先问到这里吧，也不知道有没有好心的大牛帮忙解答下。小弟苦等啊···
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1楼 2015-07-27 20:02:12
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)
哎，就没有大牛肯帮小弟一把吗？自顶！
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2楼2015-07-28 22:04:11
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1510050322

银虫 (初入文坛)
回复1：因该是转膜的问题吧。你确定你的转膜条件完全的一样吗？
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3楼2015-07-29 21:44:45
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1510050322 at 2015-07-29 21:44:45
回复1：因该是转膜的问题吧。你确定你的转膜条件完全的一样吗？

是不是蛋白浓度的问题？另外我用的PBST的PH从来没有测过。会不会有影响？
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4楼2015-08-01 22:01:19
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2015-08-10 20:24:36
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