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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提质粒后进行单双酶切，为什么都会切成模带呢？
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王希lily

新虫 (初入文坛)

[求助] 提质粒后进行单双酶切，为什么都会切成模带呢？已有3人参与

我的载体是Pet32a，目的片段连在ncoi和EcoRI的，PcR检测目的片段正确，但是酶切检测就切成模带？切不出来是什么原因呢？求给位指点迷经，不胜感激！

提质粒后进行单双酶切，为什么都会切成模带呢？


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1楼2015-09-20 15:47:27
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA都没弄干净，酶切还是算了吧

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2楼2015-09-20 16:53:56
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lulujiwei

新虫 (初入文坛)
有可能是酶切位点改变了

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3楼2015-09-20 18:00:44
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惠子934

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也在酶切，还没切出来，准备改变一下酶的浓度

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4楼2015-09-20 18:12:19
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王希lily

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-09-20 16:53:56
RNA都没弄干净，酶切还是算了吧

怎么知道RNA弄干净没有呢？

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5楼2015-09-20 18:38:54
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王希lily

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lulujiwei at 2015-09-20 18:00:44
有可能是酶切位点改变了

没有呢，测序回来是正确的呢

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6楼2015-09-20 18:39:19
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lulujiwei

新虫 (初入文坛)
你的make r是DL2000吗

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7楼2015-09-20 20:41:26
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王希lily

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lulujiwei at 2015-09-20 20:41:26
你的make r是DL2000吗

嗯，是的

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8楼2015-09-21 00:00:48
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反应链

新虫 (正式写手)
请问你使用哪些限制性内切酶？所有的酶切组合都是这样子的吗？

酶切验证，一般首选单酶切多片段的。
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9楼2015-09-21 14:59:33
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情毒之殇

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议酶切之前跑个胶吧，看看这个是不是杂质吧，然后才能知道是因为杂质还是酶切不好造成的，还有把buffer换成新的
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我们的心是荒野还是沃土？！
10楼2015-09-21 19:22:47
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