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su-qiong

新虫 (初入文坛)

[交流] 求高手帮帮忙!拜托~拜托~ 已有3人参与

双酶切质粒和目的片段,并分别做胶回收。之后用T4连接酶进行连接。。连接后转化挑单克隆摇菌,提质粒。提完后发现质粒的大小变小了。原来的质粒有4700多,提完后变成3000多。是怎么回事呀?急!急!急!请高手帮帮忙。谢谢~
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:04:25
提完后变成3000多,是做了单酶切电泳分析吗?如果没有做单酶切,那直接电泳肯定会比理论值偏小,因为超螺旋结构质粒会比实际质粒偏小。
2楼2014-11-22 00:15:53
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Look_2014

金虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:04:34
超螺旋结构的质粒电泳时迁移率会变大,即你所说的分子量看上去好像变小了,不必太担心,如果测序结果是对的话,质粒变不变小都无所谓…

[ 发自小木虫客户端 ]
Look
3楼2014-11-22 00:38:53
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gaolt

金虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:04:41
你那个原来的质粒4700多是酶切之前的还是酶切之后的,如果是酶切之前的,做一次单酶切试一次,如果是酶切后的,那肯定变小了。
4楼2014-11-22 08:51:33
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su-qiong

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-11-22 00:15:53
提完后变成3000多,是做了单酶切电泳分析吗?如果没有做单酶切,那直接电泳肯定会比理论值偏小,因为超螺旋结构质粒会比实际质粒偏小。

有做单酶切验证。单酶切就是3000多。。。
5楼2014-11-24 14:41:31
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su-qiong

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Look_2014 at 2014-11-22 00:38:53
超螺旋结构的质粒电泳时迁移率会变大,即你所说的分子量看上去好像变小了,不必太担心,如果测序结果是对的话,质粒变不变小都无所谓…

跑电泳的时候使用supercolid Marker。这个是专门跑质粒的。。也有做单酶切再跑电泳。结果还是变小了。
6楼2014-11-24 14:45:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by su-qiong at 2014-11-24 14:41:31
有做单酶切验证。单酶切就是3000多。。。...

那重新连吧,或许载体中有突变,产生了额外的酶切位点,另外你质粒来源可靠吗,有很多原因呀。
7楼2014-11-24 19:00:03
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