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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手，求助一个问题，如何验证转录因子与目的基因互作？有哪些方法呢？
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行板如歌

金虫 (小有名气)

[求助] 新手，求助一个问题，如何验证转录因子与目的基因互作？有哪些方法呢？ 已有3人参与

RT-qPCR实验筛选出了几个差异表达的基因，对这几个基因启动子区域分析，表明启动子区域含有一个能与ARF转录因子结合的顺式作用元件，但是用什么方法能验证ARF转录因子真的结合在该基因的启动子上呢？先前实验室只做到定量表达分析上，没有做过验证，有什么方法能验证蛋白质与DNA的结合呢？
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1楼 2015-09-18 15:59:07
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
行板如歌: 金币+5, ★有帮助, 实验室没有酵母体系，不知道有公司做这个没有？ 2015-09-18 19:15:36
做个酵母单杂就行

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2楼2015-09-18 16:09:05
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wx3280065

银虫 (小有名气)
酵母单杂交，凝胶迁移

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3楼2015-09-18 16:10:57
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wx3280065

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
行板如歌: 金币+5, ★有帮助, 送公司应该选什么技术来测比较准确呢？ 2015-09-18 19:16:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by wx3280065 at 2015-09-18 16:10:57
酵母单杂交，凝胶迁移

送公司把，估计一两k就出来了，酵母杂交实验要建酵母体系，很麻烦，凝胶阻滞实验要用到放射性同位素。

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4楼2015-09-18 16:14:56
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wangtaodluf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
行板如歌: 金币+5, ★有帮助, 谢谢，我研究下chip的操作流程 2015-09-18 19:17:32
chip应该是目前最直接的证明

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5楼2015-09-18 16:54:30
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huagnshaowu

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2015-09-18 18:24:25
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tcl-
7楼2015-09-18 18:36:43
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wx3280065

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wx3280065 at 2015-09-18 16:14:56
送公司把，估计一两k就出来了，酵母杂交实验要建酵母体系，很麻烦，凝胶阻滞实验要用到放射性同位素。
...

这个不清楚，我们课题组去年也遇到这问题，最后定的做酵母，因为我们的转录因子还设计到与其他蛋白形成异二聚体的问题，所以单杂双杂一起做了，就没有考虑免疫共沉淀和凝胶阻滞实验。

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8楼2015-09-19 06:36:19
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734699268

新虫 (初入文坛)
CHIP
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9楼2015-09-19 11:53:13
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