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1楼 2015-09-15 10:16:50

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viki_MDK

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降解了，，其实还能看到完整的片段，最上面的条带，，如果样本没有了，，可以割胶回收最上面那个条带，，有的话重新提取，提取中小心些，，避免反复冻融。

3楼2015-09-15 10:46:21

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zqw徒弟

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降解了，你查下步骤看哪里有过剧烈的摇晃

15楼2015-09-16 09:03:25

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然处

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yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:52

引用回帖:

14楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 08:23:54
（1）检测中去，但是DNA提取过程中，RNA不稳定，应该没有了吧？
（2）测230，260吸光度，需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品，
（3）我的DNA只有50ul,比色皿4ml，稀释100倍不知道可以不？...

有时候还是会有rna污染，确实不多。我们都是用depc水稀释的。有专门测核酸的吸光度机的，用1微升原液就可以

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迷茫会结束的

19楼2015-09-16 13:02:17

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微笑小霏

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17楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 10:57:14
只是进行了总DNA提取，没有进行PCR扩增，就是看是否有DNA才进行跑胶测定的，有加longding buffer,
（1）我的电泳图怎么样，还是不好
（2）有没有提取污泥DNA的方法，提供下...

我做的是稻田土壤微生物的，用的试剂盒，我觉得你的DNA提取方法不是不可以。提的总DNA的话产生这种弥散是正常的，因为DNA中含有杂质，并且DNA所含种类甚多，这些DNA没有相同的退火温度，我觉得出现这种弥散是正常现象。你需要PCR扩增，这样才能把目的DNA扩出来，现在这样单纯的跑总DNA是没有意义的。

20楼2015-09-16 13:27:06

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书生的哥哥啊

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正常啊，你这是提取的DNA，又没有PCR过，最上面的那个就是你提的啊，你没有试试怎么知道用这个P不出来呢，是吧

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6楼2015-09-15 16:55:30

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微笑小霏

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yinzengjie: 金币+5, ★有帮助 2015-09-16 14:34:26
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:23

你做的是活性淤泥的，提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA，跑出弥散是正常的，不清楚你跑DNA是什么目的，一般是看是否有DNA才进行跑胶测定，另外，你有没有加loading buffer，没有加的话也有弥散的可能。若是提完了短时间（1~2d）是不会降解的，DNA断裂也相当的不容易，除非有剧烈的震荡了。退火温度倒是有可能的。

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16楼2015-09-16 09:08:48

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learningying

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这是基因组还是RNA如果是的话，先告诉你核酸降解啦。。。

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加油，天道酬勤

24楼2015-09-16 19:37:32

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kobe199613

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好像是DNA断裂了，DNA为长链核酸，容易断裂，提取的操作中应避免搅拌过度导致断裂。
个人观点，仅供参考

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【招聘】医用高分子材料研发工程师（北京）

2楼2015-09-15 10:43:15

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Mr. Cong

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请问是用什么方法提的DNA？

4楼2015-09-15 14:53:32

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jeff瓜瓜

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条带弥散，提高退火温度可以增加条带的特异性，不妨试一下

5楼2015-09-15 16:02:51

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憨憨可爱多

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应该是讲解了，条带弥散的

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7楼2015-09-15 20:18:57

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yinzengjie

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4楼: Originally posted by Mr. Cong at 2015-09-15 14:53:32
请问是用什么方法提的DNA？

电泳图从左往右，1号没有研磨，2,3号用研钵研磨了活性污泥

1.jpg

2.jpg

8楼2015-09-15 21:00:12

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yinzengjie

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6楼: Originally posted by 书生的哥哥啊 at 2015-09-15 16:55:30
正常啊，你这是提取的DNA，又没有PCR过，最上面的那个就是你提的啊，你没有试试怎么知道用这个P不出来呢，是吧

是的，我的样品是活性污泥，我现在的电泳图只是进行了DNA 提取，并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧？刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢？
（1）拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了？
（2）拖尾还是因为提取的DNA中有杂质像RNA/腐殖酸/蛋白质等？
这样的条带对我将来需要做DGGE和qPCR可以用吗，有影响吗
非常感谢回答

9楼2015-09-15 21:17:08

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用试剂盒提取，powersoil可以试试

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