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yinzengjie

新虫 (小有名气)

[求助] 提取DNA后,跑琼脂凝胶电泳,怎么没有出现条带,求分析 已有19人参与

怎么会出现这样的图,帮忙分析下,什么原因。

提取DNA后,跑琼脂凝胶电泳,怎么没有出现条带,求分析
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:13:23
降解了,,其实还能看到完整的片段,最上面的条带,,如果样本没有了,,可以割胶回收最上面那个条带,,有的话重新提取,提取中小心些,,避免反复冻融。
3楼2015-09-15 10:46:21
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zqw徒弟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
降解了,你查下步骤看哪里有过剧烈的摇晃
15楼2015-09-16 09:03:25
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然处

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:52
引用回帖:
14楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 08:23:54
(1)检测中去,但是DNA提取过程中,RNA不稳定,应该没有了吧?
(2)测230,260吸光度,需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品,
(3)我的DNA只有50ul,比色皿4ml,稀释100倍不知道可以不?...

有时候还是会有rna污染,确实不多。我们都是用depc水稀释的。有专门测核酸的吸光度机的,用1微升原液就可以

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迷茫会结束的
19楼2015-09-16 13:02:17
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 10:57:14
只是进行了总DNA提取,没有进行PCR扩增,就是看是否有DNA才进行跑胶测定的,有加longding buffer,
(1)我的电泳图怎么样,还是不好
(2)有没有提取污泥DNA的方法,提供下...

我做的是稻田土壤微生物的,用的试剂盒,我觉得你的DNA提取方法不是不可以。提的总DNA的话产生这种弥散是正常的,因为DNA中含有杂质,并且DNA所含种类甚多,这些DNA没有相同的退火温度,我觉得出现这种弥散是正常现象。你需要PCR扩增,这样才能把目的DNA扩出来,现在这样单纯的跑总DNA是没有意义的。
20楼2015-09-16 13:27:06
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书生的哥哥啊

铜虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:13:51
正常啊,你这是提取的DNA,又没有PCR过,最上面的那个就是你提的啊,你没有试试怎么知道用这个P不出来呢,是吧

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6楼2015-09-15 16:55:30
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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yinzengjie: 金币+5, 有帮助 2015-09-16 14:34:26
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:23
你做的是活性淤泥的,提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA,跑出弥散是正常的,不清楚你跑DNA是什么目的,一般是看是否有DNA才进行跑胶测定,另外,你有没有加loading buffer,没有加的话也有弥散的可能。若是提完了短时间(1~2d)是不会降解的,DNA断裂也相当的不容易,除非有剧烈的震荡了。退火温度倒是有可能的。
16楼2015-09-16 09:08:48
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)

这是基因组还是RNA如果是的话,先告诉你核酸降解啦。。。

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加油,天道酬勤
24楼2015-09-16 19:37:32
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普通回帖

kobe199613

木虫之王 (知名作家)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:13:16
好像是DNA断裂了,DNA为长链核酸,容易断裂,提取的操作中应避免搅拌过度导致断裂。
个人观点,仅供参考

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【招聘】医用高分子材料研发工程师(北京)
2楼2015-09-15 10:43:15
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Mr. Cong

铁虫 (初入文坛)

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请问是用什么方法提的DNA?
4楼2015-09-15 14:53:32
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-09-15 19:13:40
条带弥散,提高退火温度可以增加条带的特异性,不妨试一下
5楼2015-09-15 16:02:51
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

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应该是讲解了,条带弥散的

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7楼2015-09-15 20:18:57
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yinzengjie

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Mr. Cong at 2015-09-15 14:53:32
请问是用什么方法提的DNA?

电泳图从左往右,1号没有研磨,2,3号用研钵研磨了活性污泥
提取DNA后,跑琼脂凝胶电泳,怎么没有出现条带,求分析-1
1.jpg


提取DNA后,跑琼脂凝胶电泳,怎么没有出现条带,求分析-2
2.jpg

8楼2015-09-15 21:00:12
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yinzengjie

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 书生的哥哥啊 at 2015-09-15 16:55:30
正常啊,你这是提取的DNA,又没有PCR过,最上面的那个就是你提的啊,你没有试试怎么知道用这个P不出来呢,是吧

是的,我的样品是活性污泥,我现在的电泳图只是进行了DNA 提取,并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧?刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢?
(1)拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了?
(2)拖尾还是因为提取的DNA中有杂质像RNA/腐殖酸/蛋白质等?
这样的条带对我将来需要做DGGE和qPCR可以用吗,有影响吗
                                                                 非常感谢回答
9楼2015-09-15 21:17:08
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1314308002

新虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-09-16 20:09:28
用试剂盒提取,powersoil可以试试

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10楼2015-09-16 06:59:11
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