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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取DNA后，跑琼脂凝胶电泳，怎么没有出现条带，求分析
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199006287956

木虫 (著名写手)
降解了

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追求不惜，奋斗不息
11楼2015-09-16 07:08:47
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然处

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-15 21:17:08
是的，我的样品是活性污泥，我现在的电泳图只是进行了DNA 提取，并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧？刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢？
（1）拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了？
（ ...

有可能是断裂，

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迷茫会结束的
12楼2015-09-16 07:16:39
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然处

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-15 21:17:08
是的，我的样品是活性污泥，我现在的电泳图只是进行了DNA 提取，并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧？刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢？
（1）拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了？
（ ...

有可能是断裂，实验中混匀的时候一点要轻，也有可能是rna污染，可以加一步去rna。建议先测下浓度，根据230,260的吸光度

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迷茫会结束的
13楼2015-09-16 07:21:26
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yinzengjie

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 然处 at 2015-09-16 07:21:26
有可能是断裂，实验中混匀的时候一点要轻，也有可能是rna污染，可以加一步去rna。建议先测下浓度，根据230,260的吸光度
...

（1）检测中去，但是DNA提取过程中，RNA不稳定，应该没有了吧？
（2）测230，260吸光度，需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品，
（3）我的DNA只有50ul,比色皿4ml，稀释100倍不知道可以不？
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14楼2015-09-16 08:23:54
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zqw徒弟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降解了，你查下步骤看哪里有过剧烈的摇晃
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15楼2015-09-16 09:03:25
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yinzengjie: 金币+5, ★有帮助 2015-09-16 14:34:26
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:23
你做的是活性淤泥的，提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA，跑出弥散是正常的，不清楚你跑DNA是什么目的，一般是看是否有DNA才进行跑胶测定，另外，你有没有加loading buffer，没有加的话也有弥散的可能。若是提完了短时间（1~2d）是不会降解的，DNA断裂也相当的不容易，除非有剧烈的震荡了。退火温度倒是有可能的。
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16楼2015-09-16 09:08:48
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yinzengjie

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 微笑小霏 at 2015-09-16 09:08:48
你做的是活性淤泥的，提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA，跑出弥散是正常的，不清楚你跑DNA是什么目的，一般是看是否有DNA才进行跑胶测定，另外，你有没有加loading buffer，没有加的话也有弥散的可能。若是提 ...

只是进行了总DNA提取，没有进行PCR扩增，就是看是否有DNA才进行跑胶测定的，有加longding buffer,
（1）我的电泳图怎么样，还是不好
（2）有没有提取污泥DNA的方法，提供下
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17楼2015-09-16 10:57:14
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chenllili

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用啥方法提的什么材料的DNA？杂质多，有降解，再看你的胶那么脏，换换电泳液，做个好胶，重跑一遍看看！

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18楼2015-09-16 11:04:14
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然处

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:52
引用回帖:
14楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 08:23:54
（1）检测中去，但是DNA提取过程中，RNA不稳定，应该没有了吧？
（2）测230，260吸光度，需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品，
（3）我的DNA只有50ul,比色皿4ml，稀释100倍不知道可以不？...

有时候还是会有rna污染，确实不多。我们都是用depc水稀释的。有专门测核酸的吸光度机的，用1微升原液就可以

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迷茫会结束的
19楼2015-09-16 13:02:17
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 10:57:14
只是进行了总DNA提取，没有进行PCR扩增，就是看是否有DNA才进行跑胶测定的，有加longding buffer,
（1）我的电泳图怎么样，还是不好
（2）有没有提取污泥DNA的方法，提供下...

我做的是稻田土壤微生物的，用的试剂盒，我觉得你的DNA提取方法不是不可以。提的总DNA的话产生这种弥散是正常的，因为DNA中含有杂质，并且DNA所含种类甚多，这些DNA没有相同的退火温度，我觉得出现这种弥散是正常现象。你需要PCR扩增，这样才能把目的DNA扩出来，现在这样单纯的跑总DNA是没有意义的。
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20楼2015-09-16 13:27:06
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