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199006287956

木虫 (著名写手)

追求不惜,奋斗不息
11楼2015-09-16 07:08:47
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然处

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-15 21:17:08
是的,我的样品是活性污泥,我现在的电泳图只是进行了DNA 提取,并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧?刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢?
(1)拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了?
( ...

有可能是断裂,

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迷茫会结束的
12楼2015-09-16 07:16:39
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然处

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-15 21:17:08
是的,我的样品是活性污泥,我现在的电泳图只是进行了DNA 提取,并没有进行PCR扩增。请问图上部应该是我提取的DNA条带吧?刚接触分子生物。
为什么会有那么长的拖尾呢?
(1)拖尾是DNA降解了还是DNA断裂了?
( ...

有可能是断裂,实验中混匀的时候一点要轻,也有可能是rna污染,可以加一步去rna。建议先测下浓度,根据230,260的吸光度

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迷茫会结束的
13楼2015-09-16 07:21:26
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yinzengjie

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 然处 at 2015-09-16 07:21:26
有可能是断裂,实验中混匀的时候一点要轻,也有可能是rna污染,可以加一步去rna。建议先测下浓度,根据230,260的吸光度
...

(1)检测中去,但是DNA提取过程中,RNA不稳定,应该没有了吧?
(2)测230,260吸光度,需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品,
(3)我的DNA只有50ul,比色皿4ml,稀释100倍不知道可以不?
14楼2015-09-16 08:23:54
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zqw徒弟

铜虫 (小有名气)

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降解了,你查下步骤看哪里有过剧烈的摇晃
15楼2015-09-16 09:03:25
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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yinzengjie: 金币+5, 有帮助 2015-09-16 14:34:26
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:23
你做的是活性淤泥的,提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA,跑出弥散是正常的,不清楚你跑DNA是什么目的,一般是看是否有DNA才进行跑胶测定,另外,你有没有加loading buffer,没有加的话也有弥散的可能。若是提完了短时间(1~2d)是不会降解的,DNA断裂也相当的不容易,除非有剧烈的震荡了。退火温度倒是有可能的。
16楼2015-09-16 09:08:48
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yinzengjie

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 微笑小霏 at 2015-09-16 09:08:48
你做的是活性淤泥的,提的DNA不是单独的DNA而是一个总量的DNA,跑出弥散是正常的,不清楚你跑DNA是什么目的,一般是看是否有DNA才进行跑胶测定,另外,你有没有加loading buffer,没有加的话也有弥散的可能。若是提 ...

只是进行了总DNA提取,没有进行PCR扩增,就是看是否有DNA才进行跑胶测定的,有加longding buffer,
(1)我的电泳图怎么样,还是不好
(2)有没有提取污泥DNA的方法,提供下
17楼2015-09-16 10:57:14
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chenllili

铜虫 (正式写手)

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用啥方法提的什么材料的DNA?杂质多,有降解,再看你的胶那么脏,换换电泳液,做个好胶,重跑一遍看看!

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18楼2015-09-16 11:04:14
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然处

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yinzengjie: 金币+5 2015-09-25 16:31:52
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14楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 08:23:54
(1)检测中去,但是DNA提取过程中,RNA不稳定,应该没有了吧?
(2)测230,260吸光度,需要用去离子水稀释还是用TE缓冲液稀释DNA样品,
(3)我的DNA只有50ul,比色皿4ml,稀释100倍不知道可以不?...

有时候还是会有rna污染,确实不多。我们都是用depc水稀释的。有专门测核酸的吸光度机的,用1微升原液就可以

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迷茫会结束的
19楼2015-09-16 13:02:17
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微笑小霏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by yinzengjie at 2015-09-16 10:57:14
只是进行了总DNA提取,没有进行PCR扩增,就是看是否有DNA才进行跑胶测定的,有加longding buffer,
(1)我的电泳图怎么样,还是不好
(2)有没有提取污泥DNA的方法,提供下...

我做的是稻田土壤微生物的,用的试剂盒,我觉得你的DNA提取方法不是不可以。提的总DNA的话产生这种弥散是正常的,因为DNA中含有杂质,并且DNA所含种类甚多,这些DNA没有相同的退火温度,我觉得出现这种弥散是正常现象。你需要PCR扩增,这样才能把目的DNA扩出来,现在这样单纯的跑总DNA是没有意义的。
20楼2015-09-16 13:27:06
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