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LIAOLU

新虫 (小有名气)

[交流] 各位,革兰氏阳性菌质粒老是提取不出来,但PCR又做的很成功的,这是怎么回事 已有6人参与

我用的是EZMA质粒小提试剂盒,各位看看有没有什么要注意的地方

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LIAOLU

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by yangtzelv at 2015-09-13 21:30:17
革兰氏阳性菌质粒抽提与阴性菌不同,可购买相应试剂盒,或者自己在P1溶液中加入5-20mg/ml的溶菌酶,37℃温浴10-15min,其它按试剂盒操作。
按你的实验现象推理,假阳性居多。

今天加了3mg/l的溶菌酶,还是没有提取出来。为什么要温浴呢

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16楼2015-09-14 21:00:08
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baichi121234

禁虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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2楼2015-09-11 23:23:52
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酒家何处

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:03
如果确定菌液中有质粒。质粒提取,溶液II比较重要。裂解的作用。加入溶液二之后有没变澄清。没变的话氢氧化钠失效。补加一些。如果澄清的话。应该是上注液的问题。上柱丢失,应该是试剂盒的问题。可以找厂家。

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3楼2015-09-11 23:37:34
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renzhiq

木虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:19
你用的什么菌?革阳大多数中的质粒拷贝数很低,不可从中直接提取。更不能完全按照质粒小提的方法提取,需要注意两点。一是破壁,二是防止核酸酶降解。

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4楼2015-09-12 08:23:50
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