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各位，革兰氏阳性菌质粒老是提取不出来，但PCR又做的很成功的，这是怎么回事 已有6人参与
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我用的是EZMA质粒小提试剂盒，各位看看有没有什么要注意的地方 发自小木虫Android客户端 |
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:03
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如果确定菌液中有质粒。质粒提取，溶液II比较重要。裂解的作用。加入溶液二之后有没变澄清。没变的话氢氧化钠失效。补加一些。如果澄清的话。应该是上注液的问题。上柱丢失，应该是试剂盒的问题。可以找厂家。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2015-09-11 23:37:34
baichi121234
禁虫 (职业作家)
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2楼2015-09-11 23:23:52
renzhiq
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:19
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你用的什么菌？革阳大多数中的质粒拷贝数很低，不可从中直接提取。更不能完全按照质粒小提的方法提取，需要注意两点。一是破壁，二是防止核酸酶降解。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-09-12 08:23:50
jackyoung
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:38
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:38
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这里不针对试剂盒提任何意见，前提是你选的适用这个菌株而且没有问题就好。 拷贝数是个大问题，而拷贝数与所用质粒种类和菌株特性有关，所谓的提不提的出来其实是量的问题，太少的话很难直接检测倒是事实。 菌液PCR假阳性率很高，一则严格的正负对照，二则得到条带不代表每个都能提取得到（指多克隆）。 祝好 发自小木虫Android客户端 |
5楼2015-09-12 08:55:17
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