应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位，革兰氏阳性菌质粒老是提取不出来，但PCR又做的很成功的，这是怎么回事
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
161/2返回列表12下一页
查看: 2217  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

LIAOLU

新虫 (小有名气)

[交流] 各位，革兰氏阳性菌质粒老是提取不出来，但PCR又做的很成功的，这是怎么回事 已有6人参与

我用的是EZMA质粒小提试剂盒，各位看看有没有什么要注意的地方

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-09-11 22:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

酒家何处

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:03
如果确定菌液中有质粒。质粒提取，溶液II比较重要。裂解的作用。加入溶液二之后有没变澄清。没变的话氢氧化钠失效。补加一些。如果澄清的话。应该是上注液的问题。上柱丢失，应该是试剂盒的问题。可以找厂家。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-09-11 23:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

baichi121234

禁虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
2楼2015-09-11 23:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renzhiq

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:19
你用的什么菌？革阳大多数中的质粒拷贝数很低，不可从中直接提取。更不能完全按照质粒小提的方法提取，需要注意两点。一是破壁，二是防止核酸酶降解。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-12 08:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:01:38
这里不针对试剂盒提任何意见，前提是你选的适用这个菌株而且没有问题就好。
拷贝数是个大问题，而拷贝数与所用质粒种类和菌株特性有关，所谓的提不提的出来其实是量的问题，太少的话很难直接检测倒是事实。
菌液PCR假阳性率很高，一则严格的正负对照，二则得到条带不代表每个都能提取得到（指多克隆）。
祝好

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
CestLaVie
5楼2015-09-12 08:55:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIAOLU

新虫 (小有名气)
照这样说，我选的这个菌株作PCR很可能会出现假阳性咯？难怪在平板上没有长出来

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-12 09:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIAOLU

新虫 (小有名气)
我是用菌落作PCR

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-12 09:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIAOLU

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by renzhiq at 2015-09-12 08:23:50
你用的什么菌？革阳大多数中的质粒拷贝数很低，不可从中直接提取。更不能完全按照质粒小提的方法提取，需要注意两点。一是破壁，二是防止核酸酶降解。

马疫链球菌

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2015-09-12 09:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIAOLU

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by baichi121234 at 2015-09-11 23:23:52
什么叫pcr做的很成功

作PCR出现有条带，不过可能是假阳性

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-12 09:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIAOLU

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-11 23:37:34
如果确定菌液中有质粒。质粒提取，溶液II比较重要。裂解的作用。加入溶液二之后有没变澄清。没变的话氢氧化钠失效。补加一些。如果澄清的话。应该是上注液的问题。上柱丢失，应该是试剂盒的问题。可以找厂家。
...

我准备加一点溶菌酶，行吗？不知道250ul的可以加多少

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-12 09:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LIAOLU 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭