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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位，革兰氏阳性菌质粒老是提取不出来，但PCR又做的很成功的，这是怎么回事
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LIAOLU

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by jackyoung at 2015-09-12 08:55:17
这里不针对试剂盒提任何意见，前提是你选的适用这个菌株而且没有问题就好。
拷贝数是个大问题，而拷贝数与所用质粒种类和菌株特性有关，所谓的提不提的出来其实是量的问题，太少的话很难直接检测倒是事实。
菌液PCR ...

我下次挑单克隆

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11楼2015-09-12 09:39:33
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
★
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本帖内容被屏蔽
12楼2015-09-12 10:04:28
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renzhiq

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by LIAOLU at 2015-09-12 09:34:36
马疫链球菌
...

Pcr的精度很高的，有质粒当然能扩增出来。你想提出来的，需先加溶菌酶破壁再提取。溶菌酶便宜，你可以多加一点……

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13楼2015-09-12 21:21:24
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你怎么验证没有提出来?生工的试剂盒很不错!很好用,不会出现提不出来!

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14楼2015-09-12 23:14:44
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-13 23:02:09
革兰氏阳性菌质粒抽提与阴性菌不同，可购买相应试剂盒，或者自己在P1溶液中加入5-20mg/ml的溶菌酶，37℃温浴10-15min，其它按试剂盒操作。
按你的实验现象推理，假阳性居多。
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15楼2015-09-13 21:30:17
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LIAOLU

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yangtzelv at 2015-09-13 21:30:17
革兰氏阳性菌质粒抽提与阴性菌不同，可购买相应试剂盒，或者自己在P1溶液中加入5-20mg/ml的溶菌酶，37℃温浴10-15min，其它按试剂盒操作。
按你的实验现象推理，假阳性居多。

今天加了3mg/l的溶菌酶，还是没有提取出来。为什么要温浴呢

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16楼2015-09-14 21:00:08
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