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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)

[求助] SDS PAGE的问题,样品总是跑不出来 如图 希望大神指点 已有2人参与

我做的是蚕茧的蛋白,用LISCN溶液溶解,然后再跑SDS PAGE胶,但是样品煮完离心完了之后很粘稠,有时会卡在点样孔里,跑的时候也不是一条直线,而是有宽度的,如图,而且跑完之后没有条带,急求原因,望大神赐教,感激不尽

SDS PAGE的问题,样品总是跑不出来 如图  希望大神指点
IMG_20150827_204534.jpg
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奋进的女孩

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有marker么?很黏稠有可能是你的蛋白浓度太大了~可以适当稀释下

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-08-27 23:33:44
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
莫失莫忘xin: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-28 13:25:22
Mark有,在最右边,这位置点的。。。
目标蛋白多少kd?胶浓度多大?溶解完全么?表达蛋白粘稠的话先稀释,再跑电泳。
如果稀释后,还有这类问题可以将样品加热煮沸后,再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇,或可加适量EDTA试试看。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-08-28 10:15:39
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-28 10:15:39
Mark有,在最右边,这位置点的。。。
目标蛋白多少kd?胶浓度多大?溶解完全么?表达蛋白粘稠的话先稀释,再跑电泳。
如果稀释后,还有这类问题可以将样品加热煮沸后,再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇,或可加适量 ...

恩,Marker能够正常跑出来,目的条带大约40KD左右,我用的浓缩胶5%,分离胶10%,然后昨天跑完后发现没有目的条带,都好多次了,不知道什么原因
4楼2015-08-28 13:24:26
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-28 23:02:44
最近我也在做,我的蛋白跟你差不多大小,就是粗提液离心,然后直接点样,不会出现你这样的情况,估计你这样会很严重的拖尾,条带不集中,你说沉淀浓稠,应该稀释下试试看
1111
5楼2015-08-28 14:58:33
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2015-08-28 14:58:33
最近我也在做,我的蛋白跟你差不多大小,就是粗提液离心,然后直接点样,不会出现你这样的情况,估计你这样会很严重的拖尾,条带不集中,你说沉淀浓稠,应该稀释下试试看

恩,很粘稠,但是跑不出条带,是不是蛋白含量少啊
6楼2015-08-28 15:44:21
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫失莫忘xin at 2015-08-28 15:44:21
恩,很粘稠,但是跑不出条带,是不是蛋白含量少啊...

直接得到蛋白粗提液,离心后电泳试试,不要煮沸变性
1111
7楼2015-08-28 19:52:41
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2015-08-28 19:52:41
直接得到蛋白粗提液,离心后电泳试试,不要煮沸变性...

恩好的,谢谢
8楼2015-08-28 22:29:51
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

9楼2015-08-28 22:40:53
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lingshao405

金虫 (著名写手)

我看你用的是预染的Marker,顺便问一下你染色脱色了不?
加油,加加油!
10楼2015-08-29 09:18:35
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