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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » SDS PAGE的问题，样品总是跑不出来 如图 希望大神指点
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)

[求助] SDS PAGE的问题，样品总是跑不出来 如图 希望大神指点 已有2人参与

我做的是蚕茧的蛋白，用LISCN溶液溶解，然后再跑SDS PAGE胶，但是样品煮完离心完了之后很粘稠，有时会卡在点样孔里，跑的时候也不是一条直线，而是有宽度的，如图，而且跑完之后没有条带，急求原因，望大神赐教，感激不尽

SDS PAGE的问题，样品总是跑不出来 如图  希望大神指点
IMG_20150827_204534.jpg
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1楼 2015-08-27 20:59:13
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奋进的女孩

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有marker么？很黏稠有可能是你的蛋白浓度太大了～可以适当稀释下

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-08-27 23:33:44
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莫失莫忘xin: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-08-28 13:25:22
Mark有，在最右边，这位置点的。。。
目标蛋白多少kd？胶浓度多大？溶解完全么？表达蛋白粘稠的话先稀释，再跑电泳。
如果稀释后，还有这类问题可以将样品加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，或可加适量EDTA试试看。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-08-28 10:15:39
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-28 10:15:39
Mark有，在最右边，这位置点的。。。
目标蛋白多少kd？胶浓度多大？溶解完全么？表达蛋白粘稠的话先稀释，再跑电泳。
如果稀释后，还有这类问题可以将样品加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，或可加适量 ...

恩，Marker能够正常跑出来，目的条带大约40KD左右，我用的浓缩胶5%，分离胶10%，然后昨天跑完后发现没有目的条带，都好多次了，不知道什么原因
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4楼2015-08-28 13:24:26
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-28 23:02:44
最近我也在做，我的蛋白跟你差不多大小，就是粗提液离心，然后直接点样，不会出现你这样的情况，估计你这样会很严重的拖尾，条带不集中，你说沉淀浓稠，应该稀释下试试看
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1111
5楼2015-08-28 14:58:33
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2015-08-28 14:58:33
最近我也在做，我的蛋白跟你差不多大小，就是粗提液离心，然后直接点样，不会出现你这样的情况，估计你这样会很严重的拖尾，条带不集中，你说沉淀浓稠，应该稀释下试试看

恩，很粘稠，但是跑不出条带，是不是蛋白含量少啊
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6楼2015-08-28 15:44:21
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫失莫忘xin at 2015-08-28 15:44:21
恩，很粘稠，但是跑不出条带，是不是蛋白含量少啊...

直接得到蛋白粗提液，离心后电泳试试，不要煮沸变性
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1111
7楼2015-08-28 19:52:41
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莫失莫忘xin

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 虫虫笑了 at 2015-08-28 19:52:41
直接得到蛋白粗提液，离心后电泳试试，不要煮沸变性...

恩好的，谢谢
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8楼2015-08-28 22:29:51
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2015-08-28 22:40:53
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lingshao405

金虫 (著名写手)
我看你用的是预染的Marker，顺便问一下你染色脱色了不？
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加油，加加油！
10楼2015-08-29 09:18:35
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