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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题！！！
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张小博

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题！！！ 已有12人参与

之前配制了考马斯亮蓝显色液，看各种文献说颜色变化应该是红棕色，显色液pH应为酸性，但是配制好的显色液颜色由红棕色变为深青蓝色，测的蛋白质含量也偏低，但是测了显色液的pH，的确在2左右，想问一下做过的大神们，配置好的显色液定容后的颜色是否为红棕色？？？
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1楼 2015-08-27 14:28:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biosep

至尊木虫 (著名写手)
★
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考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
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3楼2015-08-27 15:14:14
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liyibo373

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对的，我配G-250，加95%乙醇溶解，再加磷酸后，颜色是棕红色。此过程中尽量避光，并且稀释定容之前最好过滤一下，因为G-250可能会溶解不完全。
之后5倍稀释定容后的颜色是蓝色的，虽然文献中说的是棕红色，可我配过五六次了，还是蓝色的。配好的考马斯亮蓝要避光保存。1-3个月左右后应该显色就没有一开始那么好了。
个人建议配好的G-250不要立即5倍稀释定容，直接避光4度保存，用的时候好5倍稀释，用多少吸多少
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互相交流，互相学习，共同进步
7楼2015-08-27 20:33:18
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844919296

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
红色，配完后放置过滤，还记得砂芯漏斗那瘆人的红色

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10楼2015-09-01 01:01:32
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普通回帖

biosep

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我记得 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种，蛋白染色用的是G-250，看看你的正确否
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2楼2015-08-27 15:06:10
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
★
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G-250溶液配制后是青蓝色的，测浓度用G-250溶液要求配制精确，否则测出来不精确，对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线，对比一下。另外，用G-250测浓度是受温度影响的，温度低时，测出的浓度会偏低，蛋白与考马斯亮蓝反应时间2min就够了。
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4楼2015-08-27 16:17:59
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张小博

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosep at 2015-08-27 15:06:10
我记得 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种，蛋白染色用的是G-250，看看你的正确否

是G-250，显色液的颜色应该是什么呢
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5楼2015-08-27 16:54:18
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张小博

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-08-27 16:17:59
G-250溶液配制后是青蓝色的，测浓度用G-250溶液要求配制精确，否则测出来不精确，对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线，对比一下。另外，用G-250测浓度是受温度影响的，温度低时，测出的浓度会偏低，蛋白 ...

那文献上的红棕 色是没定容前的颜色，对么？
稀释到1升后是青蓝色？
还有在配制G-250溶液时，需要避光配制么？
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6楼2015-08-27 16:57:22
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
配好是红棕色

发自小木虫Android客户端
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8楼2015-08-28 23:09:12
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安安刘轩儿

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
考马斯亮蓝R250应该为蓝色，G250偏红棕色。
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9楼2015-08-31 16:03:23
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