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张小博

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题!!! 已有12人参与

之前配制了考马斯亮蓝显色液,看各种文献说颜色变化应该是红棕色,显色液pH应为酸性,但是配制好的显色液颜色由红棕色变为深青蓝色,测的蛋白质含量也偏低,但是测了显色液的pH,的确在2左右,想问一下做过的大神们,配置好的显色液定容后的颜色是否为红棕色???
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biosep

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
3楼2015-08-27 15:14:14
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liyibo373

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对的,我配G-250,加95%乙醇溶解,再加磷酸后,颜色是棕红色。此过程中尽量避光,并且稀释定容之前最好过滤一下,因为G-250可能会溶解不完全。
之后5倍稀释定容后的颜色是蓝色的,虽然文献中说的是棕红色,可我配过五六次了,还是蓝色的。配好的考马斯亮蓝要避光保存。1-3个月左右后应该显色就没有一开始那么好了。
个人建议配好的G-250不要立即5倍稀释定容,直接避光4度保存,用的时候好5倍稀释,用多少吸多少
互相交流,互相学习,共同进步
7楼2015-08-27 20:33:18
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844919296

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
红色,配完后放置过滤,还记得砂芯漏斗那瘆人的红色

发自小木虫Android客户端
10楼2015-09-01 01:01:32
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普通回帖

biosep

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我记得 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种,蛋白染色用的是G-250,看看你的正确否
2楼2015-08-27 15:06:10
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syhzlsd

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
G-250溶液配制后是青蓝色的,测浓度用G-250溶液要求配制精确,否则测出来不精确,对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线,对比一下。另外,用G-250测浓度是受温度影响的,温度低时,测出的浓度会偏低,蛋白与考马斯亮蓝反应时间2min就够了。
4楼2015-08-27 16:17:59
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张小博

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosep at 2015-08-27 15:06:10
我记得 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种,蛋白染色用的是G-250,看看你的正确否

是G-250,显色液的颜色应该是什么呢
5楼2015-08-27 16:54:18
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张小博

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-08-27 16:17:59
G-250溶液配制后是青蓝色的,测浓度用G-250溶液要求配制精确,否则测出来不精确,对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线,对比一下。另外,用G-250测浓度是受温度影响的,温度低时,测出的浓度会偏低,蛋白 ...

那文献上的红棕 色是没定容前的颜色,对么?
稀释到1升后是青蓝色?
还有在配制G-250溶液时,需要避光配制么?
6楼2015-08-27 16:57:22
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

8楼2015-08-28 23:09:12
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安安刘轩儿

新虫 (初入文坛)


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考马斯亮蓝R250应该为蓝色,G250偏红棕色。
9楼2015-08-31 16:03:23
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