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张小博

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题!!! 已有12人参与

之前配制了考马斯亮蓝显色液,看各种文献说颜色变化应该是红棕色,显色液pH应为酸性,但是配制好的显色液颜色由红棕色变为深青蓝色,测的蛋白质含量也偏低,但是测了显色液的pH,的确在2左右,想问一下做过的大神们,配置好的显色液定容后的颜色是否为红棕色???
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张小博

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-08-27 16:17:59
G-250溶液配制后是青蓝色的,测浓度用G-250溶液要求配制精确,否则测出来不精确,对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线,对比一下。另外,用G-250测浓度是受温度影响的,温度低时,测出的浓度会偏低,蛋白 ...

那文献上的红棕 色是没定容前的颜色,对么?
稀释到1升后是青蓝色?
还有在配制G-250溶液时,需要避光配制么?
6楼2015-08-27 16:57:22
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biosep

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我记得 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种,蛋白染色用的是G-250,看看你的正确否
2楼2015-08-27 15:06:10
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biosep

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
3楼2015-08-27 15:14:14
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syhzlsd

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
G-250溶液配制后是青蓝色的,测浓度用G-250溶液要求配制精确,否则测出来不精确,对于新配制的G-250要用已知浓度的BSA做标准曲线,对比一下。另外,用G-250测浓度是受温度影响的,温度低时,测出的浓度会偏低,蛋白与考马斯亮蓝反应时间2min就够了。
4楼2015-08-27 16:17:59
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