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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物电泳图这样，求指点。。。
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小小苏26

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物电泳图这样，求指点。。。 已有5人参与

求大神指点，香菇DNA PCR产物，跑出来这样，不知是哪个环节出了问题。本人菜鸟一枚，无人指点，全靠自己摸索，跪求！！！

PCR产物电泳图这样，求指点。。。
苏晨曦0.JPG
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1楼 2015-08-22 11:43:38
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半醒半梦

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:09:03
你拍的图片不清晰，虽然点了marker，但是电泳也没跑好。
目标条带这么大一团，根据经验是二聚体，目标条带可能没有P出来。
你预期的目标条带多大？
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只要想起一生中后悔的事，梅花便落满了南山。
2楼2015-08-22 14:33:52
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小小苏26

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 半醒半梦 at 2015-08-22 14:33:52
你拍的图片不清晰，虽然点了marker，但是电泳也没跑好。
目标条带这么大一团，根据经验是二聚体，目标条带可能没有P出来。
你预期的目标条带多大？

750左右。
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3楼2015-08-22 15:40:58
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半醒半梦

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小苏26 at 2015-08-22 15:40:58
750左右。...

那基本确定你没有P出目标条带。建议用高效率扩增酶，使用适当的模板量。
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只要想起一生中后悔的事，梅花便落满了南山。
4楼2015-08-22 16:57:35
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小小苏26: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2015-08-23 09:13:30
PCR做不出来，应该有很多原因：
首先，要确认有没有提到样品的总DNA。刚做，建议用相关试剂盒提取，避免走太多的弯路。
其次，你的引物序列是非正确？
再就是，PCR反应了。PCR退火温度与你的引物“退火温度 (Tm)”是否一致；水是否是双蒸水以上级别的；Taq酶、dNTP、buffer等配制是否合适，建议用公司卖的PCRmix，这个比较方便，只要加模板、引物、PCRmix、水就可以了，不容易出错。
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haloarchaeon
5楼2015-08-23 08:02:28
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是你的模板问题，如果模板纯度浓度都好，片段也不是小片段的话，用别人用过的引物肯定能p出来的，试着重新提取DNA
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6楼2015-08-23 09:35:15
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有你跑电泳时把电泳仪啊之类要用的都好好洗一遍，你这成的像太模糊了，不知道是做的胶污染了还是镜头的问题，好好擦一擦呦
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7楼2015-08-23 13:49:51
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云破月来xxz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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应该是没有P出来吧。感觉是引物二聚体，而且条带那么亮，很有可能是引物设计存在很大问题。
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做好自己
8楼2015-08-23 15:04:29
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)
首先拍胶请把加央孔放上面，还有marker是多大的，胶制作的时候EB不要加太多，背景略高，还有成像仪不是特别干净啊
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9楼2015-08-24 11:31:34
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发现微妙

新虫 (初入文坛)

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你应该是用文献中的引物来P的吧，所以我感觉最主要的问题还在于模板的浓度和纯度。那比较亮的拖带因该是引物二聚体，但是亮度差异很大，可能移液枪操作不稳定。
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10楼2015-08-24 15:31:27
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