| 查看: 521 | 回复: 0 | ||
[求助]
在做RGA为标记的分子标记试验，可是一直出不来结果，求有经验的师兄师姐指点！
|
|
在做RGA做标记的分子标记试验，但是条带特别少，只有在1000bp左右才有条带，其他分子量的地方都没有条带或者很浅。。。 试验大体这样做的： 50 μL PCR体系包括10×buffer 5 μL，25 mM 氯化镁10 μL，2.5 mM dNTPs 4 μL,1U Taq 酶0.4 μL，引物 60ng，模版40ng。 程序是：94度5min，40个循环包括94度1min，45度1min，72度2min，最后72度7min，12度10min。 产物8 μL+3 μL 95%甲酰胺上样缓冲液，95℃煮5min，上样5μL，5%变性PAGE分离，1600v，70w预电泳，1400v，60w电泳到溴酚蓝跑至3/4为止。 银染。 我有一对引物，它们的相对分子质量不一样，一个是6616.4，一个是1308.6，其中后者带有一个次黄嘌呤修饰，引物工作浓度为10 uM，引物加入量为60ng，前者加入1μL，后者0.5 μL。 图是最近跑出来的一个。  _B274338.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有217人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
SSR分子标记的时候为什么部分DNA不能跑出来
已经有11人回复
- 求助各位高手：做SSR分子标记时，只知道上下游引物,请问如何知道所需目的片段的大小
已经有9人回复
- SRAP分子标记跑不出好的条带
已经有7人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
30