24小时热门版块排行榜

返回列表

406587521

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 21.8
帖子: 19
在线: 58.4小时
虫号: 1717486
注册: 2012-03-26
专业: 植物化学保护

[求助] 在做RGA为标记的分子标记试验，可是一直出不来结果，求有经验的师兄师姐指点！

在做RGA做标记的分子标记试验，但是条带特别少，只有在1000bp左右才有条带，其他分子量的地方都没有条带或者很浅。。。
试验大体这样做的：
50 μL PCR体系包括10×buffer 5 μL，25 mM 氯化镁10 μL，2.5 mM dNTPs 4 μL,1U Taq 酶0.4 μL，引物 60ng，模版40ng。
程序是：94度5min，40个循环包括94度1min，45度1min，72度2min，最后72度7min，12度10min。
产物8 μL+3 μL 95%甲酰胺上样缓冲液，95℃煮5min，上样5μL，5%变性PAGE分离，1600v，70w预电泳，1400v，60w电泳到溴酚蓝跑至3/4为止。
银染。
我有一对引物，它们的相对分子质量不一样，一个是6616.4，一个是1308.6，其中后者带有一个次黄嘌呤修饰，引物工作浓度为10 uM，引物加入量为60ng，前者加入1μL，后者0.5 μL。
图是最近跑出来的一个。

_B274338.JPG

回复此楼