| 查看: 3432 | 回复: 10 | ||
zeroon木虫 (正式写手)
|
[求助]
做亚细胞定位，主要是定位液泡，请问融合蛋白表达载体应该如何构建呢 已有2人参与
|
|
|
看到文献中，液泡中的的蛋白酶——羧肽酶，常作为marker蛋白定位，既给这个蛋白融合一段gfp，然后在细胞内即可定位液泡的位置。 但是找了好多文献，都没具体写清楚分子构建那地方是怎么样的。 我应该在羧肽酶基因的后面直接跟着加上gfp序列呢，还是中间隔开几个序列再加？看到这篇文献Visualization of vacuoles in Aspergillus oryzae by expression of CPY–EGFP。 里面提到First,the CPY–EGFP expression plasmid was constructed to constitutively express CPY–EGFP fusion protein,which contains six amino acids between CPY and EGFP,under A. oryzae pgkA promoter,which is a constitutively expressing strong promoter of 3-phosphoglycerate kinase gene。 我觉得好奇怪啊，为什么在CPY和EGFP之间加入6个氨基酸呢？而且这篇文章通篇也没写清楚到底这6个氨基酸是什么？ 求做过相关研究的大神给与指导，不慎感激。 |
回复此楼» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 帮忙找一下这篇文献的原英文文献？急！ 拜谢！！！
已经有3人回复
- 应届硕士求职
已经有4人回复
- 求助：关于一篇生物化学类文章的投稿问题 寻求大家帮助 预计投稿IF在6-7左右的期刊
已经有6人回复
- 以前做基因转录调控及蛋白亚细胞定位研究，能否找到做离子通道方面的博后？
已经有3人回复
- 中科院植物所2012年度应届毕业生招聘启事
已经有8人回复
- 微生物学的几个研究方向，考研的同学们可以借鉴一下！
已经有12人回复
- 纸上谈药，一个畅销药的奋斗史（4）
已经有6人回复
- 【求助/交流】求构载体高手 赐教构建亚细胞定位载体pCAMBIA1302
已经有4人回复
- 【推荐】973 三维培养干细胞自我更新与定向分化的调控网络
已经有9人回复
- 【推荐】973 蛋白质主要降解途径-细胞自噬的分子机制及功能
已经有9人回复
- 【分享】我的研发我的团
已经有11人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
zeroon: 金币+5, ★有帮助, 额，谢谢，可能懂了一些 2015-08-22 22:00:49
zeroon: 金币+5, ★有帮助, 额，谢谢，可能懂了一些 2015-08-22 22:00:49
|
融合蛋白就是把你基因和GFP表达后融合在一起。我们这么亚细胞定位常做，很容易。 说白了就是有一个原核表达的空载，确定空载的GFP在多克隆位点的前边还是后边，如果GFP在多克隆位点的前边，那么在多克隆位点直接插入你目标基因（此处是你液泡羧肽酶基因，注意不要碱基移码）；如果GFP基因是在多克隆位点后边，那么把你目标基因去掉终止密码子插入多克隆位点（同上，注意插入位点到GFP起始密码子ATG，此段不要碱基移码），然后转染拟南芥染色质体或者基因枪洋葱表皮，就可以在共聚焦显微镜下观察了。 说了这么多，不知道你懂了没有。 |
7楼2015-08-22 19:03:11
2楼2015-08-19 01:24:47
3楼2015-08-19 01:27:35
zeroon
木虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1893.6
- 散金: 130
- 红花: 2
- 帖子: 350
- 在线: 68.1小时
- 虫号: 1906280
- 注册: 2012-07-23
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2015-08-19 14:38:08
 |
5楼2015-08-19 16:37:33
|
|
6楼2015-08-19 17:15:41
zeroon
木虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1893.6
- 散金: 130
- 红花: 2
- 帖子: 350
- 在线: 68.1小时
- 虫号: 1906280
- 注册: 2012-07-23
- 专业: 微生物遗传育种学
8楼2015-08-22 22:02:59
9楼2015-08-22 22:23:42
赵zhao赵
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 46
- 散金: 5
- 帖子: 27
- 在线: 7.1小时
- 虫号: 8713190
- 注册: 2018-05-10
- 性别: GG
- 专业: 无机非金属基复合材料
10楼2019-04-25 15:18:59