24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

应助: 16 (小学生)
金币: 1893.6
散金: 130
红花: 2
帖子: 350
在线: 68.1小时
虫号: 1906280
注册: 2012-07-23
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 做亚细胞定位，主要是定位液泡，请问融合蛋白表达载体应该如何构建呢已有2人参与

看到文献中，液泡中的的蛋白酶——羧肽酶，常作为marker蛋白定位，既给这个蛋白融合一段gfp，然后在细胞内即可定位液泡的位置。
但是找了好多文献，都没具体写清楚分子构建那地方是怎么样的。

我应该在羧肽酶基因的后面直接跟着加上gfp序列呢，还是中间隔开几个序列再加？看到这篇文献Visualization of vacuoles in Aspergillus oryzae by expression of
CPY–EGFP。
里面提到First,the CPY–EGFP expression plasmid was constructed to constitutively express CPY–EGFP fusion protein,which contains six amino acids between CPY and EGFP,under A. oryzae pgkA promoter,which is a constitutively expressing strong promoter of 3-phosphoglycerate kinase gene。

我觉得好奇怪啊，为什么在CPY和EGFP之间加入6个氨基酸呢？而且这篇文章通篇也没写清楚到底这6个氨基酸是什么？
求做过相关研究的大神给与指导，不慎感激。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

帮忙找一下这篇文献的原英文文献？急！拜谢！！！已经有3人回复
应届硕士求职已经有4人回复
求助：关于一篇生物化学类文章的投稿问题寻求大家帮助预计投稿IF在6-7左右的期刊已经有6人回复
以前做基因转录调控及蛋白亚细胞定位研究，能否找到做离子通道方面的博后？已经有3人回复
中科院植物所2012年度应届毕业生招聘启事已经有8人回复
微生物学的几个研究方向，考研的同学们可以借鉴一下！已经有12人回复
纸上谈药，一个畅销药的奋斗史（4）已经有6人回复
【求助/交流】求构载体高手赐教构建亚细胞定位载体pCAMBIA1302 已经有4人回复
【推荐】973 三维培养干细胞自我更新与定向分化的调控网络已经有9人回复
【推荐】973 蛋白质主要降解途径-细胞自噬的分子机制及功能已经有9人回复
【分享】我的研发我的团已经有11人回复

1楼 2015-08-18 23:41:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

应助: 16 (小学生)
金币: 1893.6
散金: 130
红花: 2
帖子: 350
在线: 68.1小时
虫号: 1906280
注册: 2012-07-23
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

7楼: Originally posted by 半醒半梦 at 2015-08-22 19:03:11
融合蛋白就是把你基因和GFP表达后融合在一起。我们这么亚细胞定位常做，很容易。
说白了就是有一个原核表达的空载，确定空载的GFP在多克隆位点的前边还是后边，如果GFP在多克隆位点的前边，那么在多克隆位点直接插 ...

你们做过液泡定位吗，还有用什么染料可以直接染色呢