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黑色的字

铁虫 (著名写手)

[求助] HPLC 反向C18柱,倒过来洗,柱压不降反升高了很多,什么情况? 已有14人参与

最近在用HPLC 反向C18柱分离一些芳香类化合物,柱子是完全新的,用了两天,柱压从87升到了121, 并且柱效也很差了(不论注射进去什么,总是在高极性60%-80%乙腈时才出来),我想是因为我的化合物跟柱子有很强的作用。于是,我决定把柱子倒过来洗,先用的50%乙腈-50%水,又用了100%甲醇,但两次洗完柱压不降反升高了很多。我都是返回到99%水-1%乙腈来测具体的柱压,然后作比较的。这种情况已经发生了好几次了。前边已经搞坏两根柱子了。不知道有没有人遇到过相同情况,也还请高手能够指点一二。真的,这是个新柱子,老板估计杀我的心都有了。
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longyi706565

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 黑色的字 at 2015-08-17 15:39:59
会吗?我用的是这一系列的柱子,http://www.mn-net.com/HPLCStart/NUCLEOSILphases/NUCLEOSILC18/tabid/6128/language/en-US/Default.aspx
能不能再帮我看看...

这柱子没用过,看填料应该是走不了纯水的,你要是不放心看下说明书或问下客服
11楼2015-08-17 16:14:56
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lwdlwd

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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黑色的字: 金币+5, 有帮助 2015-08-17 23:32:09
楼主在柱子前面加个预柱吧,把柱子堵了压力就上来了,预柱堵了换个滤膜就行,我要是你这个干法老板早就杀了我了
幽默并非在于调侃他人,而是能否经得住调侃。
13楼2015-08-17 16:28:55
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wangzhixia1

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黑色的字: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-08-17 23:26:06
这位同学,一般色谱柱是在实在用的不好的情况下,才会反过来冲柱子,这样对色谱柱伤害很大的,你拿新柱子这么冲,领导知道会气死的。还有,以后跑液相也要多思考哦,看看自己化合物的溶解性、流动相的极性、梯度等是否合理,然后再开始做实验。
相信自己
15楼2015-08-17 17:04:04
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by Pharmacy0323 at 2015-08-18 00:13:36
反冲柱子是最大的错误

现在柱子不像以前那么脆,很多柱子都是支持反冲的。
铁甲依然在
22楼2015-08-18 09:14:01
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wangzhixia1

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 黑色的字 at 2015-08-17 23:35:11
有预柱的,感觉是我的化合物吸附在填料上了?...

有预柱的话,最先损坏的是预柱,接下来的时候换个预柱继续摸索条件就好了,记得不要随便反冲。
相信自己
23楼2015-08-18 11:40:10
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TrickyVick

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+1 2015-08-17 13:38:02
黑色的字: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-08-17 15:37:11
芳香类的甲醇里不溶吧?析出了?

换极性更小的冲,比如tetrahydrofuran一类的,前提是LC能用

你跑gradient也要考虑溶解性啊,你化合物整个gradient都不溶根本不能跑啊。我跑这些都要加5%的THF的。。。
2楼2015-08-17 04:02:33
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TrickyVick

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
黑色的字: 金币+10, ★★★很有帮助, 恩,谢谢 2015-08-17 15:36:42
另外,都成这样了柱子多多少少都有点损伤了,不过应该不大

你以后跑新东西先用老柱子试
3楼2015-08-17 04:05:36
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黑色的字: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-08-17 15:40:29
用纯乙腈,低流速,正着接,过夜冲一晚上再看看
铁甲依然在
6楼2015-08-17 10:43:10
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chenenli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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黑色的字: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-08-17 15:41:00
你基本上就是用纯水冲柱子,柱子不坏才怪。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-08-17 12:18:35
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huaruishi

新虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
反冲新柱子实在该拉出去咔嚓掉。咨询下生产厂家。你就算没用过C18好歹也该看下说明书。如果样品极性太大,考虑换专用柱,别祸害C18了。
12楼2015-08-17 16:20:03
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

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C18反相柱 如何分离两种极性很近的物质
http://muchong.com/html/201111/3884974.html
14楼2015-08-17 16:47:32
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15052392315

铜虫 (初入文坛)

不是啥柱子都能反冲

[ 发自小木虫客户端 ]
16楼2015-08-17 17:26:03
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TrickyVick

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by huaruishi at 2015-08-17 16:20:03
反冲新柱子实在该拉出去咔嚓掉。咨询下生产厂家。你就算没用过C18好歹也该看下说明书。如果样品极性太大,考虑换专用柱,别祸害C18了。

现在柱子没这么娇气了,phenomenx的柱子大多都能反冲。
26楼2015-08-19 00:25:17
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TrickyVick

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 黑色的字 at 2015-08-17 15:35:53
我的化合物是芳香类和核苷连在一起的,整体上是水溶性的。可以拿THF试一下。...

先不要拿纯THF试,一点点加,毕竟THF对柱子和LC都有点伤害
27楼2015-08-19 00:29:03
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普通回帖
。。。。
4楼2015-08-17 08:13:05
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longyi706565

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黑色的字: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-08-17 15:40:15
你那什么柱子啊,居然用1%的乙腈,一般的柱子根本受不了这么高的水相,柱子不坏才怪
5楼2015-08-17 10:27:02
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黑色的字

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by TrickyVick at 2015-08-17 04:02:33
芳香类的甲醇里不溶吧?析出了?

换极性更小的冲,比如tetrahydrofuran一类的,前提是LC能用

你跑gradient也要考虑溶解性啊,你化合物整个gradient都不溶根本不能跑啊。我跑这些都要加5%的THF的。。。

我的化合物是芳香类和核苷连在一起的,整体上是水溶性的。可以拿THF试一下。
加油
8楼2015-08-17 15:35:53
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黑色的字

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by longyi706565 at 2015-08-17 10:27:02
你那什么柱子啊,居然用1%的乙腈,一般的柱子根本受不了这么高的水相,柱子不坏才怪

会吗?我用的是这一系列的柱子,http://www.mn-net.com/HPLCStart/NUCLEOSILphases/NUCLEOSILC18/tabid/6128/language/en-US/Default.aspx
能不能再帮我看看
加油
9楼2015-08-17 15:39:59
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黑色的字

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chenenli at 2015-08-17 12:18:35
你基本上就是用纯水冲柱子,柱子不坏才怪。

真的吗?我用的是这种柱子http://www.mn-net.com/HPLCStart/NUCLEOSILphases/NUCLEOSILC18/tabid/6128/language/en-US/Default.aspx
能不能帮我看看,问题出在哪里
加油
10楼2015-08-17 15:42:02
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