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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC测试结果不一致,求解决方法!!

各位大虾,

小弟刚刚从事HPLC实验操作,不曾就遇见了一个比较杯具的问题,请各位给与支持和帮助。

我现在在做一个T3,C18的反向柱HPLC实验,结果在实验过程中,开始测定标准曲线的一些列浓度测定,一直到中间靠后的样品时均出现类似图1 的峰型,结果进行到后期,就出现了类似图2的峰型,前后如果同时吸取一管样品,也会这样。

图1为标准曲线的其中一个浓度-500mM,在HPLC开始时测定,刚平衡好柱子进行的第二管样品(该样品前已做BLANK,均没有这种峰出现)。
出现峰型如图1
图2为同样该管样品,只是在我试验将要结束时又跑了该管样品一针,图形变化较大。

纠结了很久,实验也做过重复,均是一样的问题。
请求帮助

图1



图2
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

实验搞定, 试了很多方法,最后还是通过更换一下buffer,刚刚解决,还不知道是否稳定,先上来和大家分享一下,谢谢各位的帮助
35楼2012-05-23 09:38:04
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普通回帖

dlp2000

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢! 2012-05-16 09:03:22
你没说清楚,我觉得初步看是里面的两个成分。
啦啦啦啦
2楼2012-05-14 11:25:10
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dlp2000 at 2012-05-14 11:25:10:
你没说清楚,我觉得初步看是里面的两个成分。

不是两个成分,如果是未酶解的,是不会在这个位置出现峰的,只有加了相应的酶才会有峰出现,
3楼2012-05-14 11:26:19
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢! 2012-05-16 09:03:30
图一样品可能过载,也可能液相方法学耐用性低。
守候在风中的宁静。
4楼2012-05-15 13:02:05
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

怎么木有人来帮忙啊?紧急求助啊
5楼2012-05-15 13:12:12
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-15 13:02:05:
图一样品可能过载,也可能液相方法学耐用性低。

图1与图2是从一管样品中吸取进样的,唯一不同的地方就是第一针在实验开始的时候,第二针在实验快结束的时候
6楼2012-05-15 13:14:59
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by jasonwyb123 at 2012-05-15 13:14:59:
图1与图2是从一管样品中吸取进样的,唯一不同的地方就是第一针在实验开始的时候,第二针在实验快结束的时候

第一针是否充分平衡?梯度还是等度?
守候在风中的宁静。
7楼2012-05-15 13:16:41
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dingjinglvde

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢! 2012-05-16 09:03:38
是不是样品溶液不稳定啊
8楼2012-05-15 16:08:10
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dingjinglvde

木虫 (正式写手)

样品降解了,所以前面出现其他杂质峰
9楼2012-05-15 16:09:25
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guowq8834

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢! 2012-05-16 09:03:46
要么你跑到后面柱子比较脏了,这种问题我也遇到过,尤其如果是中药。也可能是你样品本身就不稳定。建议把柱子冲洗干净后再做一次,样品的测定不要间隔时间太远
10楼2012-05-15 16:15:33
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