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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » 【求助】虾青素HPLC检测
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weichun

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】虾青素HPLC检测

我最近用自己浓缩的虾青素粗色素油做了一下虾青素液相分析检测，
色谱条件：C18柱，流动相：乙腈：水=95:5，检测波长是471nm，样品用甲醇溶解的。
    但是出的谱图报告只是在2min时有个倒峰，其它什么东西都没有了，后来把检测波长换到281nm时就有一序列峰，但这肯定是其它物质，虾青素是在400多nm处吸收的。请问这是什么原因
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1楼 2011-04-17 10:08:06
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-04-17 14:51:27
weichun(金币+2): 2011-04-22 10:19:48
简单分析一下：
1、虾青素是在400多nm处吸收，为何检测波长选择471nm？选择虾青素的吸收波长，灵敏度不是更高么？
2、流动相（乙腈：水=95:5）。要知道乙腈的洗脱能力很强，这个比例下，保留性不同的物质分离效果不明显，且保留时间很短。
3、2min处的倒峰，是由于流动相或样品中物质的紫外吸收波长<检测波长引起的，也就是说，样品中紫外吸收波长小于471nm的物质，都可能会形成倒峰。

综上，我认为，471nm，乙腈：水=95:5下，样品在2min处洗脱下来，且以倒峰的信号表现出来。
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2楼2011-04-17 13:30:53
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
karl2100(金币+1): 3Q 2011-04-21 19:06:35
weichun(金币+2): 2011-04-22 10:20:01
改善方法：
1、选择适合的检测波长。不确定可以先扫紫外。
2、调整流动相中乙腈比例（乙腈比例，慢慢调试），在合适的比例上可选择流动性使用缓冲盐，调pH等，达到分离目的。
3、样品用甲醇溶解，会有溶剂效应，可以改用流动相溶解。
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3楼2011-04-17 13:35:51
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liaoyanjiao

银虫 (正式写手)
★ ★
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qinhy(金币+1): O(∩_∩)O谢谢~~~ 2011-04-21 18:59:52
weichun(金币+5): 2011-04-22 10:18:42
虾青素本身就在470nm左右有吸收的啊
流动相得改改，我看他们帮我检测时用的流动相有甲醇：二氯甲烷：乙腈：水，甲醇占85%了，其余三个比较少，自己找合适的比例吧，不能全说了
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4楼2011-04-21 14:07:49
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weichun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liaoyanjiao at 2011-04-21 14:07:49:
虾青素本身就在470nm左右有吸收的啊
流动相得改改，我看他们帮我检测时用的流动相有甲醇：二氯甲烷：乙腈：水，甲醇占85%了，其余三个比较少，自己找合适的比例吧，不能全说了

你好，我查的是商业标准（进出口动物源性虾青素检测），应该可以适用的啊，流动相我也试过用75%甲醇，也是倒峰。
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5楼2011-04-22 10:23:36
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liaoyanjiao

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
weichun(金币+5): 谢谢你的帮助，我会试试的 2011-04-24 20:50:43
他们检测时用85:5:5:5，就是上面跟你讲的那几个溶剂，在液相里大约5~7min之间出全反式的峰，8min左右出三个顺式峰。不过一般天然的几乎没有顺式，合成的有一点点顺式。反式峰形很漂亮的，不可能是倒峰，除非你的东西里面没有虾青素，或者你配置的浓度太低也会出现倒峰。
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6楼2011-04-22 11:16:41
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liaoyanjiao

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我现在天天玩虾青素，从来没出现过你讲的情况，除了刚开始没做出虾青素的时候。
还有一个，就是你要是进样时有空气，也可能会出现倒峰。
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7楼2011-04-22 11:20:21
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weichun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liaoyanjiao at 2011-04-22 11:16:41:
他们检测时用85:5:5:5，就是上面跟你讲的那几个溶剂，在液相里大约5~7min之间出全反式的峰，8min左右出三个顺式峰。不过一般天然的几乎没有顺式，合成的有一点点顺式。反式峰形很漂亮的，不可能是倒峰，除非你的东 ...

你好，谢谢你的指点，后来我浓度提高了，把用石油醚萃取的虾青素液直接测，波长选了石油醚最大吸收峰处，就没有倒峰了，请问您能把您的QQ给我吗，我看会有一些问题请教您
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8楼2011-04-24 20:55:46
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lgq101

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议首先采用甲醇-水进行洗脱
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9楼2013-07-02 11:45:42
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